小麦TaSKP2A基因抗逆相关表达分析及与其互作蛋白的筛选

发布时间：2021-04-15 04:28

　　S-期激酶相关蛋白2A （S-phase kinase-associated protein 2A, SKP2A）是一个F-box蛋白,参与植物细胞分裂的调控,并能增加拟南芥（Arabidopsis thaliana）对渗透胁迫的抗性。为探究小麦（Triticum aestivum） SKP2A基因在响应非生物逆境及病原菌侵染中的功能,本研究在克隆到小麦TaSKP2A基因的基础上,对其编码的蛋白进行了分析。结果表明,TaSKP2A编码一条381个氨基酸组成的多肽,预测其等电点和分子量分别为6.83和40.87 kD;TaSKP2A为非分泌型蛋白质,定位于细胞核上,属于富含亮氨酸重复（leucine-rich repeat, LRR）型F-box蛋白。qRT-PCR结果显示,TaSKP2A在雌蕊和旗叶中的表达量较高,在幼茎和雄蕊中较低;经水杨酸（salicylic acid, SA）和NaCl处理后TaSKP2A分别在24和48 h出现上调表达;在H₂O₂胁迫下,TaSKP2A基因整体呈现下调表达;在叶锈菌（Puccinia triticina... 

【文章来源】：农业生物技术学报. 2020,28(04)北大核心CSCD

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【部分图文】：

小麦Ta SKP2A序列特征分析

为了解TaSKP2A基因响应激素及生物/非生物逆境的表达情况，分别对小麦进行盐、干旱、H2O2、SA、MeJA、ABA和叶锈菌侵染等处理。结果表明，在不同处理下TaSKP2A基因的表达模式不同(图3)。NaCl处理后，TaSKP2A基因仅在48 h时出现明显地上调表达，为0 h的2.4倍(P<0.05)，其他时间的表达与0 h样品差异均不明显；在H2O2胁迫下，TaSKP2A基因整体呈现下调表达，至48 h，表达量仅为对照的1/4；在PEG6000模拟的干旱胁迫条件下，TaSKP2A基因表达量变化不大(图3A)。

根据文库筛选获得的靶蛋白编码基因序列结合NCBI数据库检索，获得小麦及其近缘种属中基因全长序列，以此为模板，设计合成引物，以Tc Lr15接种叶锈菌株05-19-43(2)的cDNA为模板，获得基因完整ORF区。将完整读码框序列构建AD-prey载体，与BD-TaSKP2A共转化酵母菌株AH109。在含有X-α-Gal的四缺固体培养基上进行回复验证。如图5所示，发现TaCHI和TaSKP1与TaSKP2A的组合在含有X-α-Gal的培养基上均能正常生长，且菌落呈现蓝色，表明存在相互作用。图4 TaSKP2A筛选酵母cDNA文库

【参考文献】：
期刊论文
[1]小麦Ta-SKP2A克隆及其酵母双杂交诱饵载体的构建[J]. 许媛,李铃仙,魏春茹,魏新燕,于秀梅,刘大群.  华北农学报. 2016(02)
[2]酵母双杂交系统及其应用研究进展[J]. 崔红军,魏玉清.  安徽农业科学. 2015(13)
[3]谷子F-box家族基因的鉴定、分类及干旱响应[J]. 霍冬英,郑炜君,李盼松,徐兆师,周永斌,陈明,马有志,闵东红,张小红.  作物学报. 2014(09)
[4]植物中几丁质酶的作用[J]. 欧阳石文,赵开军,冯兰香.  生物学通报. 2002(06)



本文编号：3138668