油菜SPATULA同源基因BnaA01g0073D和BnaC03g61610D的克隆和初步功能验证
发布时间：2021-06-25 12:03
植物油脂在生活中具有重要的作用,提高油料作物油脂含量是育种工作者改良作物品质性状的主要目标之一。随着分子生物学的发展,应用基因工程的方法挖掘和克隆与作物角果和种子发育的相关基因是改良作物遗传性状常用的研究方法和技术。拟南芥（Arabidopsis thaliana L.）SPATULA（AtSPT）基因是植株生长发育过程中一个重要的转录调节因子,是一个多功能基因,主要调节拟南芥花的形态建成和角果发育等多种发育过程。拟南芥功能缺失突变体spt2和spt12,角果发育受阻,且多数不育。我们研究结果发现这个基因突变体种子含油量和脂肪酸组分也发生改变。在本文的研究中,我们从甘蓝型油菜（Brassica napusL.）品种ZS72中克隆到两个BnSPTs基因,即BnaA01g0073D（BnSPT1）和BnaC03g61610D（BnSPT4）,同时对它们进行了初步的功能验证分析。这些研究结果对于提高油料作物产量和产油量具有潜在理论和应用价值。本研究所取得的主要结果如下:克隆油菜SPT同源基因BnSPT1和BnSPT4,利用qRT-PCR研究了BnSPT1和BnSPT4在油菜不同组织和角果发育...
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１．１种子不同发育阶段及特征
??图１．１种子不同发育阶段及特征。Ａ，种子内胚胎发育的典型模式；Ｂ，种子发育??阶段和储藏物积累（Ｖｉｃｅｎｔｅ－Ｃａｒｂａｊｏｓａ?ｅｔ?ａｌ．，２００５）。??Ｆｉｇ．?１．１?Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ?ｗｉｔｈｉｎ?ｔｈｅ?ｓｅｅｄ．?Ｐｈａｓｅｓ?ａｎｄ?Ｆｅａｔｕｒｅｓ．?（Ａ）?Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ?ｏｆ??ｅｍｂｒｙｏ?ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ?ｕｎｄｅｒ?ａ?ｖｉｖｉｐａｒｏｕｓ?ｐａｔｈｗａｙ?ｏｒ?ｗｉｔｈｉｎ?ｔｈｅ?ｓｅｅｄ．?（Ｂ）?Ｔｉｍｅ?ｃｏｕｒｓｅ??ｏｆ?Ａｒａｂｉｄｏｓｉｓ?ｓｅｅｄ?ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ?（ａｄａｐｔｅｄ?ｆｒｏｍ?Ｂａｕｄ?ｅｔ?ａｌ．．?２００２）?（Ｖｉｃｅｎｔｅ－Ｃａｒｂａｊｏｓａ??ｅｔ?ａｌ．，?２００５）．??１．１．２成熟干种子中主要贮藏物质??在干种子的胚和胚乳中，储藏蛋白液泡（ＰＳＶｓ：?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｓｔｏｒａｇｅ?ｖａｃｕｏｌｅｓ）和油??滴占据绝大部分空间，种子储藏蛋白和三酰甘油占据种子干重（ＤＷ：?ｄｒｙ?ｗｅｉｇｈｔ）??的３０－４０％，ＰＳＶｓ通常位于胚细胞的中央，靠近细胞核（Ｍａｎｓｆｉｅｌｄ?ｅｔａｌ．．?１９９２；?Ｃｏｈｅｎ??３??
喧要求进行管理。??２．１．２载体??本研究所用克隆载体为ｐＥＮＴＲｌＡ入门载体（图谱见图２．１）。??ｒｍＢ?Ｔ１?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ?ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ??／??ｐＵＣ?ｏｒｉｇｉｎ?ｒｍＢ?Ｔ２?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ?ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ??／?Ｖ??｜??匕?ｐＥＮＴＲｌＡ??２７１７?ｂｐ??ｙ?Ｌ＿ｃｃｄＢ??＼??．＇?一?ａｔｔＬ２??Ｋａｎ（Ｒ）??图２．１?ｐＥＮＴＲｌＡ载体图谱??Ｆｉｇｕｒｅ?２．１?Ｍａｐ?ｏｆ?ｐＥＮＴＲ?１Ａ?ｖｅｃｔｏｒ??２．２实验方法??２．２．１植物总ＲＮＡ提取??在提取植物总ＲＮＡ实验中所闬的ＲＮａｓｅ－ｆｒｅｅ的枪头、１．５ｍｌ离心管等均购??自Ａｘｙｇｅｎ幺司，７５°／。乙醇用ＤＥＰＣｈｂＯ配置。本实验采用Ｔｒｉｚｏｌ法提取提取楦??物总?ＲＮＡ，所用试剂为?Ｔａｋａｒａ?公司的?ＲＮＡｉｓｏ?Ｐｌｕｓ?试剂（Ｔａｋａｒａ?ｃｏｄｅ：?Ｄ９１０８Ａ），??具体操作步骤是按照说明书进行。方法如下：??１?４??
【参考文献】：
期刊论文
[1]油菜基因工程研究进展[J]. 田亚红,王丽萍,徐传远. 粮食与油脂. 2014(05)
[2]基因工程技术在油菜油脂中的研究进展[J]. 王会,刘佳,付丽,梅德圣. 中国农学通报. 2013(24)
[3]油菜种子油脂分子标记及QTL定位的研究进展[J]. 王欣娜,阎星颖,李加纳,刘列钊. 中国农学通报. 2012(24)
[4]我国油菜生产潜力分析[J]. 殷艳,陈兆波,余健,王汉中,冯中朝. 中国农业科技导报. 2010(03)
[5]植物脂肪酸的生物合成及其生理功能的研究进展[J]. 李昌珠,李正茂. 湖南林业科技. 2009(06)
[6]我国油菜育种目标及品种审定问题的商榷[J]. 涂金星,张冬晓,张毅,傅廷栋. 中国油料作物学报. 2007(03)
[7]我国油菜产需形势分析及产业发展对策[J]. 王汉中. 中国油料作物学报. 2007(01)
[8]我国食用植物油消费增长及其影响因素分析[J]. 王永刚. 农业技术经济. 2006(06)
[9]发展油菜生物柴油的潜力、问题与对策[J]. 王汉中. 中国油料作物学报. 2005(02)
[10]植物脂肪酸的生物合成与基因工程[J]. 卢善发. 植物学通报. 2000(06)
本文编号：3249176
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１．１种子不同发育阶段及特征
??图１．１种子不同发育阶段及特征。Ａ，种子内胚胎发育的典型模式；Ｂ，种子发育??阶段和储藏物积累（Ｖｉｃｅｎｔｅ－Ｃａｒｂａｊｏｓａ?ｅｔ?ａｌ．，２００５）。??Ｆｉｇ．?１．１?Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ?ｗｉｔｈｉｎ?ｔｈｅ?ｓｅｅｄ．?Ｐｈａｓｅｓ?ａｎｄ?Ｆｅａｔｕｒｅｓ．?（Ａ）?Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ?ｏｆ??ｅｍｂｒｙｏ?ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ?ｕｎｄｅｒ?ａ?ｖｉｖｉｐａｒｏｕｓ?ｐａｔｈｗａｙ?ｏｒ?ｗｉｔｈｉｎ?ｔｈｅ?ｓｅｅｄ．?（Ｂ）?Ｔｉｍｅ?ｃｏｕｒｓｅ??ｏｆ?Ａｒａｂｉｄｏｓｉｓ?ｓｅｅｄ?ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ?（ａｄａｐｔｅｄ?ｆｒｏｍ?Ｂａｕｄ?ｅｔ?ａｌ．．?２００２）?（Ｖｉｃｅｎｔｅ－Ｃａｒｂａｊｏｓａ??ｅｔ?ａｌ．，?２００５）．??１．１．２成熟干种子中主要贮藏物质??在干种子的胚和胚乳中，储藏蛋白液泡（ＰＳＶｓ：?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｓｔｏｒａｇｅ?ｖａｃｕｏｌｅｓ）和油??滴占据绝大部分空间，种子储藏蛋白和三酰甘油占据种子干重（ＤＷ：?ｄｒｙ?ｗｅｉｇｈｔ）??的３０－４０％，ＰＳＶｓ通常位于胚细胞的中央，靠近细胞核（Ｍａｎｓｆｉｅｌｄ?ｅｔａｌ．．?１９９２；?Ｃｏｈｅｎ??３??
喧要求进行管理。??２．１．２载体??本研究所用克隆载体为ｐＥＮＴＲｌＡ入门载体（图谱见图２．１）。??ｒｍＢ?Ｔ１?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ?ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ??／??ｐＵＣ?ｏｒｉｇｉｎ?ｒｍＢ?Ｔ２?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ?ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ??／?Ｖ??｜??匕?ｐＥＮＴＲｌＡ??２７１７?ｂｐ??ｙ?Ｌ＿ｃｃｄＢ??＼??．＇?一?ａｔｔＬ２??Ｋａｎ（Ｒ）??图２．１?ｐＥＮＴＲｌＡ载体图谱??Ｆｉｇｕｒｅ?２．１?Ｍａｐ?ｏｆ?ｐＥＮＴＲ?１Ａ?ｖｅｃｔｏｒ??２．２实验方法??２．２．１植物总ＲＮＡ提取??在提取植物总ＲＮＡ实验中所闬的ＲＮａｓｅ－ｆｒｅｅ的枪头、１．５ｍｌ离心管等均购??自Ａｘｙｇｅｎ幺司，７５°／。乙醇用ＤＥＰＣｈｂＯ配置。本实验采用Ｔｒｉｚｏｌ法提取提取楦??物总?ＲＮＡ，所用试剂为?Ｔａｋａｒａ?公司的?ＲＮＡｉｓｏ?Ｐｌｕｓ?试剂（Ｔａｋａｒａ?ｃｏｄｅ：?Ｄ９１０８Ａ），??具体操作步骤是按照说明书进行。方法如下：??１?４??
【参考文献】：
期刊论文
[1]油菜基因工程研究进展[J]. 田亚红,王丽萍,徐传远. 粮食与油脂. 2014(05)
[2]基因工程技术在油菜油脂中的研究进展[J]. 王会,刘佳,付丽,梅德圣. 中国农学通报. 2013(24)
[3]油菜种子油脂分子标记及QTL定位的研究进展[J]. 王欣娜,阎星颖,李加纳,刘列钊. 中国农学通报. 2012(24)
[4]我国油菜生产潜力分析[J]. 殷艳,陈兆波,余健,王汉中,冯中朝. 中国农业科技导报. 2010(03)
[5]植物脂肪酸的生物合成及其生理功能的研究进展[J]. 李昌珠,李正茂. 湖南林业科技. 2009(06)
[6]我国油菜育种目标及品种审定问题的商榷[J]. 涂金星,张冬晓,张毅,傅廷栋. 中国油料作物学报. 2007(03)
[7]我国油菜产需形势分析及产业发展对策[J]. 王汉中. 中国油料作物学报. 2007(01)
[8]我国食用植物油消费增长及其影响因素分析[J]. 王永刚. 农业技术经济. 2006(06)
[9]发展油菜生物柴油的潜力、问题与对策[J]. 王汉中. 中国油料作物学报. 2005(02)
[10]植物脂肪酸的生物合成与基因工程[J]. 卢善发. 植物学通报. 2000(06)
本文编号：3249176
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