水稻深绿穂调控因子DGP1的互作蛋白研究

发布时间：2021-12-25 10:51

　　在自然界中,光合作用是万物生长的能量来源,它能利用太阳能将无机物转变为有机物,为生物体代谢所使用。各种粮食作物的生产也离不开光合作用,只有充分提高光合能力,提升光合效率才能有效地增加粮食的产量,满足人类日益增长的需求。然而植物的光合作用受叶绿体发育和叶绿素合成等相关因素的影响,探索这些过程中相关基因的功能,有助于我们更好地利用光合作用,提高粮食产量。本实验室前期获得了一个水稻深绿穗dgp1（dark green panicle1）的突变体,该突变体的叶、穗都呈现出深绿表型,同时叶绿素含量增加,光合效率增强,并且已经通过图位克隆方法克隆到该基因。由于DGP1基因编码一个未知功能的蛋白,所以首先需要在水稻中筛选出与它互作的蛋白,并通过其互作蛋白的特性来深入研究该基因调控光合效率的机制。以水稻日本晴各个组织混合提取的RNA为材料,构建酵母双杂AD（PGADT7）载体上的cDNA文库。将DGP1基因构建到BD（PGBKT7）载体上,作为诱饵蛋白,它没有自激活现象。通过酵母双杂交的方法筛选DGP1的互作蛋白,发现了两个叶绿体发育相关的转录因子GOLDEN2-LIKE1（GLK1）和GOLDEN2... 

【文章来源】：浙江师范大学浙江省

【文章页数】：87 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

RNA质量的检列

ｐ，的要求。??３．１．３ｃＤＮＡ文库的检测??由于合成的ｃＤＮＡ条带富集的区域以及条带的亮度较为理想，所以经过纯??化、Ｓｆｉｌ酶切、ＣＨＲＯＭＡ?ＳＰ１Ｎ－Ｉ０００－ＴＥ过柱处理后，能与用Ｓｆｉｌ酶线性化处理??后的ｐＧＡＤＴ７载体进行连接并纯化精制为初级ｃＤＮＡ。??初级ｃＤＮＡ文库连接液转入大肠杆菌感受态细胞后，统计在氨苄抗性的培??养板上生长出的菌落个数并计算，得到初级文库库容量为＞２．〇ｘｌ〇（’ｃｆｕ，满足库??容的要求。??使用ＫｉＡＤＴ７－Ｆ和ＰＧＡＤＴ７－Ｒ的引物序列ＰＣＲ检测文库插入片段，由图??２．３的电泳图显示，插入片段集中在５００？２２５０ｂｐ之间，片段的大小分布也说明??ｃＤＮＡ文库的质量符合实验要求。??

图３．２原核表达蛋白亲和纯化后的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳图??

【参考文献】：
期刊论文
[1]花生AhHDA1互作蛋白AhGLK的筛选及特性分析[J]. 李媚娟,苏良辰,刘帅,李晓云,李玲.  作物学报. 2017(02)
[2]叶绿体分裂突变体cpd4中突变基因ARC5的鉴定与分析[J]. 沈鑫曌,刘含,刘晓庆,袁光孝,高岳芳,高宏波.  植物生理学报. 2013(05)
[3]酵母双杂交技术及其在植物研究中的应用[J]. 朱金鑫,李小方.  植物生理学通讯. 2004(02)
[4]Rubisco活化酶的研究进展[J]. 韩鹰,陈刚,王忠.  植物学通报. 2000(04)
[5]RubisCO的研究进展[J]. 陈为钧,赵贵文,顾月华.  生物化学与生物物理进展. 1999(05)



本文编号：3552318