茶树CML21启动子及CML基因家族的克隆和表达分析
发布时间：2022-01-01 22:22
茶树[Camelliasinensis（L.）O.Kuntze]是一种多年生常绿木本植物,属山茶科山茶属,是一种喜温怕寒的经济作物。由茶树叶片加工制作成的“茶”饮品被誉为“世界三大非酒精饮料”之一。环境胁迫不仅限制茶树种植区的分布,还对经济作物造成一定的经济损失,其中低温胁迫是影响茶树生长发育、茶叶产量和品质的重要因素。因此,提高茶树抗寒性是目前茶树研究人员亟待解决的课题。然而,从生理生态水平上培育抗寒性茶树品种,不仅选育周期长还难以控制育种方向以获得理想表型。所以,研究茶树在非生物胁迫的分子响应机制,通过生物技术手段有针对性地提高茶树抗逆性,对选育茶树抗性优良品种具有重要意义。针对上述科学问题,本研究对茶树类钙调蛋白基因CsCML21启动子（Calmodulin like 21 promoter,pCsCML21）进行功能分析,并从茶树良种’龙井长叶’中扩增出五个茶树CML基因,利用生物信息学和分子生物学等技术手段深入研究了它们在低温（10℃）、聚乙二醇6000（Polyethylene glycol 6000,PEG 6000）（20%）、氯化钠（Sodium chloride,N...
【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－２茶树基因组ＤＮＡ??
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将测序正确的单克隆菌液和ｐＢＩＯｌ载体进行质粒提取，电泳检测结果显示有三条??片段很大的亮带，且ｐＣｓＣＭＬ２１质粒大小略大于ｐＣｓＣＭＬ２１－Ｍ，表明质粒提取无误??符合进行下一步要求（图２－４Ａ）。??利用Ｘｂａ?Ｉ和Ｓｍａ?Ｉ酶对ｐＣｓＣＭＬ２１和ｐＣｓＣＭＬ２１－Ｍ质粒进行双酶切，酶切产物??在琼脂糖凝胶中电泳分析得到了与目的条带大小一致的条带（图２－４Ｂ），初步确定启??动子表达载体构建成功，同时送南京金斯瑞生物公司测序，分析结果也表明目的片段??没有发生碱基缺失和移码，表达载体构建成功。??Ｍ?１?２?３?Ｂ?Ｍ?１２?３??图２－４质粒提取（Ａ）及重组载体酶切（Ｂ）??Ｍ：?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ（ＤＬ２０００）；?ｌ：ｐＢＩ１０１；?２：?ｐＢＩ?１０１－ｐＣｓＣＭＬ２１?；?３：?ｐＢ１１０１－ｐＣｓＣＭＬ２１－Ｍ??Ｆｉｇ．２－４?Ｐｌａｓｍｉｄ?ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ?（Ａ）?ａｎｄ?ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ?ｏｆ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｖｅｃｔｏｒｓ?（Ｂ）??Ｍ：?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ（ＤＬ２０００）；?１：?ｐＢＩ１０１；２：?ｐＢＩ?１０１－ｐＣｓＣＭＬ２１；?３：?ｐＢＩ?１０１－ｐＣｓＣＭＬ２１－Ｍ??２．４农杆菌转化鉴定??以农杆菌菌液为模板，分别用对应的扩增引物进行ＰＣＲ扩增，在］．７?ｋｂ及１．５?ｋｂ??１７??
【参考文献】：
期刊论文
[1]茶树CsbZIP4转录因子正调控拟南芥对盐胁迫响应[J]. 曹红利,王璐,钱文俊,郝心愿,杨亚军,王新超. 作物学报. 2017(07)
[2]植物钙/钙调素介导的信号转导系统[J]. 曾后清,张亚仙,汪尚,张夏俊,王慧中,杜立群. 植物学报. 2016(05)
[3]大豆CML家族基因的生物信息学分析[J]. 陈超,端木慧子,朱丹,刘艾林,肖佳雷,朱延明. 大豆科学. 2015(06)
[4]NO调节植物低温胁迫抗性机制研究进展[J]. 牟雪姣,张远兵. 长江大学学报(自科版). 2015(21)
[5]茶树P5CS基因克隆及其在渗透和高盐胁迫下的表达分析[J]. 王丽珊,林清凡,陈兰平,池福铃,郭春芳,张积森. 热带作物学报. 2015(01)
[6]植物低温胁迫响应miRNAs及其在茶树抗寒研究中的应用[J]. 朱全武,范凯,谢艳兰,董迹芬,詹宇雯,骆耀平. 茶叶科学. 2013(03)
[7]茶树冷诱导基因的AFLP筛选及其表达分析[J]. 陈林波,李叶云,房超,朱政,江昌俊. 西北植物学报. 2011(01)
[8]盐胁迫对白桦种子萌发和幼苗生长的影响[J]. 许晓英. 中国林业. 2011(01)
[9]A Genome-wide Functional Characterization of Arabidopsis Regulatory Calcium Sensors in Pollen Tubes[J]. Liming Zhou1,2, Ying Fu1,2 and Zhenbiao Yang2,3 (1State Key Laboratory of Plant Physiology and Biochemistry, Department of Plant Sciences, College of Biological Sciences, China Agricultural University, Beijing 100193, China; 2China Agricultural University (CAU)-University of California, Riverside (UCR) Joint Center for Biological Sciences and Biotechnology, College of Biological Sciences, China Agricultural University, Beijing 100193, China; 3Center for Plant Cell Biology and Department of Botany and Plant Sciences, University of California, Riverside, CA 92521, USA). Journal of Integrative Plant Biology. 2009(08)
[10]茶树越冬后叶片含水量与耐寒性研究初报[J]. 李秀芬,房用,乔勇进,孟振农,范丰学,尹波,樊秀京,陈家申,杨俊杰,史少军. 山东林业科技. 2004(01)
硕士论文
[1]茶树花粉CsE1α、CsCML21基因的亚细胞定位及启动子克隆与功能验证[D]. 杜昱林.南京农业大学 2015
[2]低温胁迫下茶树花粉管相关基因的分离与表达分析[D]. 蒋芯.南京农业大学 2013
[3]茶树抗寒相关基因的克隆与表达特性分析[D]. 陈林波.安徽农业大学 2010
本文编号：3562941
【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－２茶树基因组ＤＮＡ??
Ｍ?１?２??麵??图２－３?ＣｓＣＡ／Ｚ２／启动子的克隆??Ｍ：?ＤＮＡ?Ｍａｋｅｒ?（ＤＬ２０００）；?１：?启动子；２：?ＡＢＲＥ?元件缺失?ＧＣＡ／Ｚ２／启动子??Ｆｉｇ．２－３?Ｔｈｅ?ｃｌｏｎｅ?ｏｆ?ＣｓＣＭＬ２１?ｐｒｏｍｏｔｅｒ??Ｍ：?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ（ＤＬ２０００）；?１：?ｐＣｓＣＭＬ２１；２：?ｐＣｓＣＭＬ２１－Ｍ??２．３质粒及表达载体酶切鉴定??将测序正确的单克隆菌液和ｐＢＩＯｌ载体进行质粒提取，电泳检测结果显示有三条??片段很大的亮带，且ｐＣｓＣＭＬ２１质粒大小略大于ｐＣｓＣＭＬ２１－Ｍ，表明质粒提取无误??符合进行下一步要求（图２－４Ａ）。??利用Ｘｂａ?Ｉ和Ｓｍａ?Ｉ酶对ｐＣｓＣＭＬ２１和ｐＣｓＣＭＬ２１－Ｍ质粒进行双酶切，酶切产物??在琼脂糖凝胶中电泳分析得到了与目的条带大小一致的条带（图２－４Ｂ），初步确定启??动子表达载体构建成功，同时送南京金斯瑞生物公司测序，分析结果也表明目的片段??没有发生碱基缺失和移码
将测序正确的单克隆菌液和ｐＢＩＯｌ载体进行质粒提取，电泳检测结果显示有三条??片段很大的亮带，且ｐＣｓＣＭＬ２１质粒大小略大于ｐＣｓＣＭＬ２１－Ｍ，表明质粒提取无误??符合进行下一步要求（图２－４Ａ）。??利用Ｘｂａ?Ｉ和Ｓｍａ?Ｉ酶对ｐＣｓＣＭＬ２１和ｐＣｓＣＭＬ２１－Ｍ质粒进行双酶切，酶切产物??在琼脂糖凝胶中电泳分析得到了与目的条带大小一致的条带（图２－４Ｂ），初步确定启??动子表达载体构建成功，同时送南京金斯瑞生物公司测序，分析结果也表明目的片段??没有发生碱基缺失和移码，表达载体构建成功。??Ｍ?１?２?３?Ｂ?Ｍ?１２?３??图２－４质粒提取（Ａ）及重组载体酶切（Ｂ）??Ｍ：?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ（ＤＬ２０００）；?ｌ：ｐＢＩ１０１；?２：?ｐＢＩ?１０１－ｐＣｓＣＭＬ２１?；?３：?ｐＢ１１０１－ｐＣｓＣＭＬ２１－Ｍ??Ｆｉｇ．２－４?Ｐｌａｓｍｉｄ?ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ?（Ａ）?ａｎｄ?ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ?ｏｆ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｖｅｃｔｏｒｓ?（Ｂ）??Ｍ：?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ（ＤＬ２０００）；?１：?ｐＢＩ１０１；２：?ｐＢＩ?１０１－ｐＣｓＣＭＬ２１；?３：?ｐＢＩ?１０１－ｐＣｓＣＭＬ２１－Ｍ??２．４农杆菌转化鉴定??以农杆菌菌液为模板，分别用对应的扩增引物进行ＰＣＲ扩增，在］．７?ｋｂ及１．５?ｋｂ??１７??
【参考文献】：
期刊论文
[1]茶树CsbZIP4转录因子正调控拟南芥对盐胁迫响应[J]. 曹红利,王璐,钱文俊,郝心愿,杨亚军,王新超. 作物学报. 2017(07)
[2]植物钙/钙调素介导的信号转导系统[J]. 曾后清,张亚仙,汪尚,张夏俊,王慧中,杜立群. 植物学报. 2016(05)
[3]大豆CML家族基因的生物信息学分析[J]. 陈超,端木慧子,朱丹,刘艾林,肖佳雷,朱延明. 大豆科学. 2015(06)
[4]NO调节植物低温胁迫抗性机制研究进展[J]. 牟雪姣,张远兵. 长江大学学报(自科版). 2015(21)
[5]茶树P5CS基因克隆及其在渗透和高盐胁迫下的表达分析[J]. 王丽珊,林清凡,陈兰平,池福铃,郭春芳,张积森. 热带作物学报. 2015(01)
[6]植物低温胁迫响应miRNAs及其在茶树抗寒研究中的应用[J]. 朱全武,范凯,谢艳兰,董迹芬,詹宇雯,骆耀平. 茶叶科学. 2013(03)
[7]茶树冷诱导基因的AFLP筛选及其表达分析[J]. 陈林波,李叶云,房超,朱政,江昌俊. 西北植物学报. 2011(01)
[8]盐胁迫对白桦种子萌发和幼苗生长的影响[J]. 许晓英. 中国林业. 2011(01)
[9]A Genome-wide Functional Characterization of Arabidopsis Regulatory Calcium Sensors in Pollen Tubes[J]. Liming Zhou1,2, Ying Fu1,2 and Zhenbiao Yang2,3 (1State Key Laboratory of Plant Physiology and Biochemistry, Department of Plant Sciences, College of Biological Sciences, China Agricultural University, Beijing 100193, China; 2China Agricultural University (CAU)-University of California, Riverside (UCR) Joint Center for Biological Sciences and Biotechnology, College of Biological Sciences, China Agricultural University, Beijing 100193, China; 3Center for Plant Cell Biology and Department of Botany and Plant Sciences, University of California, Riverside, CA 92521, USA). Journal of Integrative Plant Biology. 2009(08)
[10]茶树越冬后叶片含水量与耐寒性研究初报[J]. 李秀芬,房用,乔勇进,孟振农,范丰学,尹波,樊秀京,陈家申,杨俊杰,史少军. 山东林业科技. 2004(01)
硕士论文
[1]茶树花粉CsE1α、CsCML21基因的亚细胞定位及启动子克隆与功能验证[D]. 杜昱林.南京农业大学 2015
[2]低温胁迫下茶树花粉管相关基因的分离与表达分析[D]. 蒋芯.南京农业大学 2013
[3]茶树抗寒相关基因的克隆与表达特性分析[D]. 陈林波.安徽农业大学 2010
本文编号：3562941
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