MfWAK和MsLRPK基因功能研究

发布时间：2023-04-20 01:26

　　紫花苜蓿素有“牧草之王”的称呼,是我国畜牧业发展所需粗蛋白的重要来源,低温是影响紫花苜蓿生长导致产量下降的主要逆境之一。黄花苜蓿(Medicago falcata L.)是一种非常耐寒、耐旱的豆科牧草,是苜蓿抗性育种的重要基因库,从中挖掘抗寒相关基因对于培育紫花苜蓿抗寒新品种十分重要。本文对响应低温的Mf WAK和MsLRPK基因的功能进行分析,主要研究结果如下:通过农杆菌介导的方法将过表达Mf WAK基因的载体转化截形苜蓿,获得转基因植株,经过PCR检测,获得5株阳性植株,通过实时荧光定量PCR检测Mf WAK基因的表达量,结果显示转基因植株编号A35-8、A14、A41、A1-4、A17中Mf WAK基因得到较高水平的表达,不同株系间的表达量存在差异,株系编号A1-4的Mf WAK基因表达量最高。对转基因植株的抗寒性进行了检测,结果显示野生型的半致死温度为-2℃左右,转基因植株的半致死温度在-3℃到-6℃之间,与野生型的差异显著。转基因植株中A1-4半致死温度最低(为-6℃),A17半致死温度最高(为-3℃)。结果表明表达Mf WAK基因能提高截形苜蓿抗寒性。本实验室前期研究中,发...

【文章页数】：47 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
1 前言
    1.1 低温对植物的影响
    1.2 黄花苜蓿和紫花苜蓿的抗寒性差异
    1.3 CRISPR/ Cas9 基因编辑技术在植物中的应用
    1.4 类受体蛋白激酶的研究进展
    1.5 研究目的和意义
2 材料与方法
    2.1 材料
    2.2 材料培养与处理
        2.2.1 截形苜蓿的培养
        2.2.2 紫花苜蓿的培养
        2.2.3 材料的处理
    2.3 主要仪器设备和试剂
        2.3.1 主要仪器
        2.3.2 主要试剂
        2.3.3 培养基配方
    2.4 实验方法
        2.4.1 总RNA的提取
        2.4.2 cDNA第一链的合成
        2.4.3 MsLRPK基因克隆
        2.4.4 MsLRPK打靶载体的构建
        2.4.5 农杆菌介导转化苜蓿
        2.4.6 转基因苜蓿DNA的提取
        2.4.7 PCR检测转基因苜蓿的bar基因
        2.4.8 PCR检测转基因紫花苜蓿的MsLRPK基因
        2.4.9 实时荧光定量PCR
        2.4.10 半致死温度测定
        2.4.11 相对电导率测定
3 结果与分析
    3.1 MFWAK基因的功能分析
        3.1.1 过表达MfWAK基因转基因植物的分子检测
        3.1.2 转基因截形苜蓿抗寒性分析
    3.2 MSLRPK基因的功能分析
        3.2.1 MsLRPK基因的克隆与核酸序列分析
        3.2.2 MsLRPK蛋白理化性质预测
        3.2.3 MsLRPK蛋白的序列分析
        3.2.4 低温对MsLRPK基因表达的影响
        3.2.5 MsLRPK基因敲除载体的构建
        3.2.6 转基因紫花苜蓿的分子检测
        3.2.7 转基因紫花苜蓿耐寒性分析
4 讨论与结论
    4.1 MfWAK蛋白与植物的耐寒性
    4.2 MSLRPK蛋白与植物的耐寒性
    4.3 基因编辑技术CRISPR/ Cas9 在紫花苜蓿中的应用
    4.4 结论
致谢
参考文献
附录



本文编号：3794606