银杏3个WD40转录因子基因的克隆及表达量分析

发布时间：2023-05-04 03:07

　　银杏是现存古老的孑遗植物,其具有丰富的药理活性及食用价值,主要生理活性成分为类黄酮和萜内酯。银杏类黄酮具有消除自由基、抗氧化、抗肿瘤、治疗心血管疾病等药理活性,其药用价值受到全世界的广泛关注,提高类黄酮含量已成为目前研究银杏的热点。传统栽培育种周期较长且见效慢,基因工程大多集中在改造类黄酮生物合成途径中单个关键酶基因上,然而类黄酮的合成途径复杂,并不是由一两个关键基因所能决定的。转录因子可以调控类黄酮生物合成相关多个关键基因的表达,从而提高类黄酮含量的积累。因此,研究转录调控方面是提高类黄酮生物合成的另一个手段。本文利用已构建的银杏叶转录组数据库,采用RACE生物技术,从银杏叶片中成功筛选克隆得到3个GbWD40基因序列,分别命名为GbWD401、GbWD402和GbWD403。并对3个GbWD40转录因子基因序列特征进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR技术检测3个GbWD40基因在银杏不同组织部位及外源胁迫处理下的表达模式,并构建融合表达载体进行亚细胞定位分析。主要内容及结果如下:(1)GbWD401基因包含一段2313bp的开放阅读框,编码一个长770aa的肽链,预测其编码的...

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第1章 前言
    1.1 黄酮类化合物
        1.1.1 黄酮类化合物的结构与分类
        1.1.2 黄酮类化合物的功能作用
        1.1.3 提高银杏中类黄酮含量的研究
    1.2 转录因子
        1.2.1 转录因子的结构与功能
        1.2.2 转录因子研究进展
        1.2.3 转录因子的研究方法
    1.3 转录因子WD40
        1.3.1 转录因子WD40的结构特点
        1.3.2 转录因子WD40的功能
    1.4 本课题研究目的及意义
第2章 银杏转录因子WD40基因克隆及表达量分析
    2.1 材料
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 生物学试剂
        2.1.3 培养基与缓冲液
        2.1.4 仪器设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 银杏样本总RNA的提取
        2.2.2 反转录cDNA的合成
        2.2.3 银杏WD40转录因子基因中间片段的克隆
        2.2.4 银杏WD40转录因子基因的 3’-RACE
        2.2.5 银杏WD40转录因子基因的 5’-RACE
        2.2.6 目的片段的回收
        2.2.7 目的基因与载体的连接
        2.2.8 银杏WD40转录因子基因cDNA全长的扩增
        2.2.9 利用实时荧光定量分析Gb WD40基因的表达
        2.2.10 酶切处理表达载体
        2.2.11 目的片段与酶切产物连接
        2.2.12 重组质粒转化大肠杆菌
        2.2.13 提取大肠杆菌质粒
        2.2.14 土壤农杆菌感受态的制备及转化
        2.2.15 亚细胞定位
        2.2.16 生物信息学分析
第3章 结果与分析
    3.1 银杏总RNA的检测
        3.1.1 Gb WD401基因
        3.1.2 Gb WD402基因
        3.1.3 Gb WD403基因
    3.2 讨论
        3.2.1 银杏Gb WD40转录因子功能分析
        3.2.2 银杏Gb WD40基因的表达量分析
        3.2.3 融合表达载体的构建
第4章 结论
    4.1 研究结论
        4.1.1 Gb WD401基因的克隆与表达量分析
        4.1.2 Gb WD402基因的克隆与表达量分析
        4.1.3 Gb WD403基因的克隆与表达量分析
    4.2 本文创新点
    4.3 展望
参考文献
致谢
攻读学位期间的研究成果



本文编号：3807828