棕色棉色素相关MYB转录因子基因的克隆及功能研究
发布时间：2023-06-03 23:38
本研究以近等基因系白色棉品种RT白絮和棕色棉品种棕1-61为材料,从形态学方面对纤维分化发育和色素沉积分布进行了研究;利用荧光定量PCR技术分析了类黄酮合成途径中结构基因及相关转录因子在不同组织中的表达模式;通过酵母单杂交技术验证MYB转录因子基因与类黄酮合成途径中结构基因的关系;通过胚珠离体培养实验分析MeJA对类黄酮合成途径中结构基因及相关转录因子表达水平的影响;通过田间喷施MeJA分析MeJA对棉纤维色差及纤维品质的影响。本研究主要结论如下:1.比较RT白絮和棕1-61棉纤维分化发育规律棕1-61胚珠表皮细胞突起较早,且发育较快,纤维分化发育早于RT白絮;棕1-61从10dpa开始已经在棉纤维细胞壁边缘形成染色较深的黑色致密物质,并随着次生壁加厚,细胞脱水,黑色致密物质逐渐靠近纤维细胞中腔,并最终沉积于纤维细胞中腔。推测该黑色致密物有可能就是棕色棉棉纤维中的色素。2.分析棕色棉不同组织类黄酮合成途径中结构基因及相关转录因子的表达水平类黄酮合成途径中的结构基因在棕1-61和RT白絮中均无组织特异性表达。GhUFGT基因与其他结构基因的表达模式不同,它在棕1-61花后25天和30天仍...
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
英文缩略表
第一章 引言
1.1 天然彩色棉的研究进展
1.1.1 色素成分
1.1.2 类黄酮合成途径
1.2 转录因子与类黄酮的合成
1.3 影响类黄酮合成的外部因素
1.4 类黄酮与纤维发育
1.5 本研究的目的和意义
第二章 棕色棉纤维分化发育规律的研究
2.1 试验材料
2.2 取样方法
2.3 试验方法
2.3.1 棉纤维分化观察方法
2.3.2 棕色棉纤维色素分布观察
2.4 结果与分析
2.4.1 棕色棉纤维分化发育规律
2.4.2 棕色棉纤维色素沉积分布规律
2.5 讨论
2.5.1 棕色棉纤维分化发育规律
2.5.2 棕色棉纤维色素沉积分布规律
第三章 棕色棉类黄酮合成途径中结构基因及转录因子的表达分析
3.1 试验材料
3.2 试验方法
3.2.1 棉花各组织总RNA的提取
3.2.2 cDNA的合成
3.2.3 实时荧光定量（Real-time quantitative PCR, qPCR）检测
3.2.4 数据处理
3.3 结果与分析
3.3.1 类黄酮合成途径中结构基因及相关转录因子在白色棉和棕色棉纤维不同时期中的表达分析
3.3.2 类黄酮合成途径中后期结构基因及相关转录因子在白色棉和棕色棉根茎叶中的表达分析
3.4 讨论
3.4.1 类黄酮合成途径中结构基因在白色棉和棕色棉纤维不同时期及不同组织中的表达差异
3.4.2 类黄酮合成途径相关转录因子在白色棉和棕色棉纤维不同时期及不同组织中的表达差异
第四章 棕色棉中MYB转录因子的克隆及酵母单杂交功能验证
4.1 试验材料
4.2 试验方法
4.2.1 棉花总RNA的提取及cDNA的合成
4.2.2 MYB转录因子基因克隆
4.2.3 T载体的连接及转化
4.2.4 棕色棉类黄酮合成途径中关键酶基因启动子分析
4.2.5 构建诱饵表达载体
4.2.6 获得含诱饵表达载体pBait-AbAi的酵母菌株
4.2.7 利用AbAr的表达检测诱饵菌株
4.2.8 构建酵母单杂交的猎物表达载体
4.2.9 点对点验证MYB转录因子与类黄酮合成过程中结构基因的互作
4.2.10 构建亚细胞定位的表达载体
4.2.11 转化农杆菌
4.2.12 烟草叶片亚细胞定位
4.3 结果与分析
4.3.1 MYB转录因子基因克隆结果
4.3.2 结构基因GhDFR、GhANS、GhANR和GhUFGT的启动子分析
4.3.3 构建诱饵表达载体（bait）
4.3.4 转化酵母菌株
4.3.5 抑制诱饵酵母菌株生长的最低AbA浓度
4.3.6 酵母单杂交中猎物表达载体（prey）的构建
4.3.7 点对点验证MYB转录因子与类黄酮合成过程中结构基因的互作结果
4.3.8 亚细胞定位表达载体的构建
4.3.9 转化农杆菌鉴定
4.3.10 烟草叶片亚细胞定位观察
4.4 讨论
第五章 MeJA处理下的胚珠离体培养
5.1 试验材料
5.2 试验方法
5.2.1 胚珠离体培养
5.2.2 离体培养后纤维RNA提取
5.2.3 离体培养后纤维cDNA的合成
5.2.4 实时荧光定量（(Real-time quantitative PCR, qPCR）检测
5.2.5 数据处理
5.3 结果与分析
5.4 讨论
第六章 田间喷施MeJA对棕色棉颜色及纤维品质的影响
6.1 试验材料
6.2 试验方法
6.2.1 田间喷施MeJA
6.2.2 分光测色仪测定彩色棉色泽的变化规律
6.2.3 棕色棉纤维品质
6.3 数据统计与分析
6.4 结果与分析
6.4.1 不同浓度MeJA处理时棉纤维色值的变化
6.4.2 不同浓度MeJA处理时棉纤维色差的变化
6.4.3 不同浓度MeJA处理时的棉纤维品质
6.5 讨论
第七章 全文结论
参考文献
致谢
作者简历
本文编号：3830260
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
英文缩略表
第一章 引言
1.1 天然彩色棉的研究进展
1.1.1 色素成分
1.1.2 类黄酮合成途径
1.2 转录因子与类黄酮的合成
1.3 影响类黄酮合成的外部因素
1.4 类黄酮与纤维发育
1.5 本研究的目的和意义
第二章 棕色棉纤维分化发育规律的研究
2.1 试验材料
2.2 取样方法
2.3 试验方法
2.3.1 棉纤维分化观察方法
2.3.2 棕色棉纤维色素分布观察
2.4 结果与分析
2.4.1 棕色棉纤维分化发育规律
2.4.2 棕色棉纤维色素沉积分布规律
2.5 讨论
2.5.1 棕色棉纤维分化发育规律
2.5.2 棕色棉纤维色素沉积分布规律
第三章 棕色棉类黄酮合成途径中结构基因及转录因子的表达分析
3.1 试验材料
3.2 试验方法
3.2.1 棉花各组织总RNA的提取
3.2.2 cDNA的合成
3.2.3 实时荧光定量（Real-time quantitative PCR, qPCR）检测
3.2.4 数据处理
3.3 结果与分析
3.3.1 类黄酮合成途径中结构基因及相关转录因子在白色棉和棕色棉纤维不同时期中的表达分析
3.3.2 类黄酮合成途径中后期结构基因及相关转录因子在白色棉和棕色棉根茎叶中的表达分析
3.4 讨论
3.4.1 类黄酮合成途径中结构基因在白色棉和棕色棉纤维不同时期及不同组织中的表达差异
3.4.2 类黄酮合成途径相关转录因子在白色棉和棕色棉纤维不同时期及不同组织中的表达差异
第四章 棕色棉中MYB转录因子的克隆及酵母单杂交功能验证
4.1 试验材料
4.2 试验方法
4.2.1 棉花总RNA的提取及cDNA的合成
4.2.2 MYB转录因子基因克隆
4.2.3 T载体的连接及转化
4.2.4 棕色棉类黄酮合成途径中关键酶基因启动子分析
4.2.5 构建诱饵表达载体
4.2.6 获得含诱饵表达载体pBait-AbAi的酵母菌株
4.2.7 利用AbAr的表达检测诱饵菌株
4.2.8 构建酵母单杂交的猎物表达载体
4.2.9 点对点验证MYB转录因子与类黄酮合成过程中结构基因的互作
4.2.10 构建亚细胞定位的表达载体
4.2.11 转化农杆菌
4.2.12 烟草叶片亚细胞定位
4.3 结果与分析
4.3.1 MYB转录因子基因克隆结果
4.3.2 结构基因GhDFR、GhANS、GhANR和GhUFGT的启动子分析
4.3.3 构建诱饵表达载体（bait）
4.3.4 转化酵母菌株
4.3.5 抑制诱饵酵母菌株生长的最低AbA浓度
4.3.6 酵母单杂交中猎物表达载体（prey）的构建
4.3.7 点对点验证MYB转录因子与类黄酮合成过程中结构基因的互作结果
4.3.8 亚细胞定位表达载体的构建
4.3.9 转化农杆菌鉴定
4.3.10 烟草叶片亚细胞定位观察
4.4 讨论
第五章 MeJA处理下的胚珠离体培养
5.1 试验材料
5.2 试验方法
5.2.1 胚珠离体培养
5.2.2 离体培养后纤维RNA提取
5.2.3 离体培养后纤维cDNA的合成
5.2.4 实时荧光定量（(Real-time quantitative PCR, qPCR）检测
5.2.5 数据处理
5.3 结果与分析
5.4 讨论
第六章 田间喷施MeJA对棕色棉颜色及纤维品质的影响
6.1 试验材料
6.2 试验方法
6.2.1 田间喷施MeJA
6.2.2 分光测色仪测定彩色棉色泽的变化规律
6.2.3 棕色棉纤维品质
6.3 数据统计与分析
6.4 结果与分析
6.4.1 不同浓度MeJA处理时棉纤维色值的变化
6.4.2 不同浓度MeJA处理时棉纤维色差的变化
6.4.3 不同浓度MeJA处理时的棉纤维品质
6.5 讨论
第七章 全文结论
参考文献
致谢
作者简历
本文编号：3830260
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/nzwlw/3830260.html
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