农杆菌介导高粱成熟胚遗传转化获得耐草甘膦植株

发布时间：2024-09-17 14:21

　　 利用萌动的成熟胚作外植体进行基因转化,可有效提高高粱转基因材料选育的效率。为了建立并完善以高粱萌动种胚作为外植体的遗传转化体系,本研究以高粱材料Is-623为转化受体,质粒pM3301UbiSpCP4为外源基因供体,采用农杆菌介导法进行遗传转化,并对转化的关键因素进行分析。结果表明,麦草畏（dicamba）诱导高粱萌动的成熟胚产生愈伤组织适宜浓度约为5 mg·L^-1;农杆菌侵染时间为2 h时遗传转化效率较高;经筛选共获得301块抗性愈伤组织,75个转化事件,经PCR、Southern blotting杂交分析、CP4-EPSPS蛋白检测试纸条检测及田间草甘膦耐性鉴定,最终获得草甘膦耐性等级1级株系6株,耐性等级2级株系3株的转基因高粱株系。本研究初步建立了以高粱萌动种胚作为外植体的遗传转化体系,为高粱遗传转化体系的研究和应用奠定了基础。

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料与试剂
        1.1.1 受体材料
        1.1.2 菌株与质粒
        1.1.3 培养基配方
            1)侵染培养基:
            2)共培养基:
            3)愈伤组织诱导培养基:
            4)筛选培养基:
            5)再生培养基:
            6)生根培养基:
    1.2 试验方法
        1.2.1 外植体的准备
        1.2.2 农杆菌的活化与外植体的侵染、转化、筛选、再生
        1.2.3 麦草畏对高粱成熟萌动胚愈伤组织诱导的影响
        1.2.4 侵染时间对高粱愈伤组织转化效率的影响
        1.2.5 转化株的PCR检测
        1.2.6 转化植株的Southern blotting分析
        1.2.7 转基因高粱CP4-EPSPS基因表达产物的测定
        1.2.8 转基因高粱耐草甘膦性能的鉴定
2 结果与分析
    2.1 转CP4-EPSPS基因高粱植株的获得
    2.2 麦草畏对高粱成熟萌动胚愈伤组织诱导的影响
    2.3 农杆菌侵染时间对高粱遗传转化效率的影响
    2.4 转基因植株的PCR分析
    2.5 转基因植株Southern blotting分析
    2.6 转基因高粱CP4-EPSPS基因表达产物的测定
    2.7 转基因高粱耐草甘膦性能的鉴定
3 讨论
4 结论



本文编号：4005575