噬菌体防治黄海希瓦氏菌引起的仿刺参疾病

发布时间：2020-07-11 17:59

【摘要】：仿刺参因其极高的营养和药用价值,成为我国单一产值最高的海水养殖品种,年产值高达300亿元以上。然而随着养殖工业化程度的不断深化,成本更低的高密度养殖手段已经成为了主流,但是这也增大了疾病传播和蔓延的风险,给海参养殖业造成巨大的经济损失。随着细菌耐药性的产生和不断增强,传统抗生素疗法的弊端也越来越明显,亟需一种替代抗生素的新型药剂。本研究将大连地区刺参腐皮综合征的主要致病菌黄海希瓦氏菌作为宿主菌,通过双层平板法在水产品市场污水中筛选裂解性噬菌体。对噬菌体进行透射电镜观察,表征其氯仿敏感性、酸碱以及温度耐受性、宿主谱、裂解量、吸附速率等生物特性,并考察噬菌体体外裂解能力。筛选得到的噬菌体PSM-1属于肌尾噬菌体,宿主专一性强,对氯仿不敏感。吸附速率实验显示大部分噬菌体在8分钟内吸附到宿主体内。一步生长曲线显示PSM-1的潜伏期与裂解期分别为20和40 min,裂解量为219 PFU/infected cell.体外抑菌效果较好,裂解活性在28℃,pH 7.0处最高。噬菌体治疗实验采取浸浴和腹腔注射两种方式给药。通过对比阴性对照组、阳性对照组以及不同的给药浓度和给药时间的实验组,考察噬菌体PSM-1对于黄海希瓦氏菌感染的防治效果。腹腔注射组可将仿刺参从存活率0%提升到80%以上,最佳给药时间在攻毒前2d到攻毒后1d；浸浴组可将仿刺参从存活率0%提升到60%以上,最佳给药时间在攻毒前1d到攻毒后2d。两个实验组在最佳给药时间以及最高给药浓度时,对仿刺参保护率均高于90%。采取噬菌体治疗实验中保护率最高的一组中的给药浓度以及给药时间作为治疗组,通过与空白对照、阴性对照在不同时间点内超氧化物歧化酶、一氧化氮合酶、溶菌酶等免疫相关酶及因子在仿刺参体腔液中的变化的对比,考察噬菌体对于仿刺参免疫应答的影响。实验表明,噬菌体对仿刺参体腔液中免疫相关酶及因子的变化有显著影响,为噬菌体在仿刺参体内裂解病原菌提供了佐证。综上所述,本研究针对引起仿刺参腐皮综合症的黄海希瓦氏菌筛选分离得到1株裂解性噬菌体,并对其进行了生物特性研究。采取注射和浸浴的给药方式控制仿刺参的腐皮综合征,)提高仿刺参保护率,并考察了给药后仿刺参体内免疫相关酶及因子的变化,为噬菌体在控制仿刺参细菌性疾病方面的应用奠定了基础。
【学位授予单位】：大连理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S947.9

【参考文献】