RBX蛋白在中华绒螯蟹精子发生过程中的表达情况及功能分析

发布时间：2020-08-11 10:54

【摘要】：RING-box protein RBX蛋白是Cullin-RING E3泛素连接酶的重要组成部分,通过泛素化-蛋白酶体途径参与细胞内蛋白的降解调控。这一类泛素化在细胞周期、生长发育、信号转导、DNA复制和修复等许多细胞进程中发挥作用,在中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)精子发生过程中同样十分重要。而其中重要的催化元件RBX蛋白在中华绒螯蟹中还尚未研究。本文根据中华绒螯蟹基因组及精巢、副性腺转录组数据,通过实验克隆获得了两个RBX基因。Es-RBX1 cDNA全长741个碱基,编码124个氨基酸,Es-RBX2 cDNA全长1325个碱基,编码110个氨基酸。生物信息学分析显示RBX的序列及结构域都非常保守,系统进化分析也与传统的分类方式一致。通过荧光定量PCR和免疫印迹实验检测了RBX的表达情况,结果显示RBX1在精巢组织中高表达,并且在精巢发育的不同阶段表现出规律的变化;而RBX2在雄性生殖组织中没有显著的表达情况。随后进一步研究了RBX1蛋白,通过免疫荧光实验检测RBX1的亚细胞定位,发现RBX1主要分布在细胞核中,并且在精子发育过程中随着细胞核形态的变化而改变,可能与细胞核的分裂关系密切。通过免疫共沉淀实验发现,中华绒螯蟹中RBX1与Cullin4互相结合,认为RBX1能够通过结合Cullin4形成Cullin-RING E3泛素连接酶,在泛素化中发挥作用。根据以上结果,认为RBX1可能通过CRL4在中华绒螯蟹精子发生过程中对细胞的分裂起到调控作用。
【学位授予单位】：华东师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S917.4

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