嗜水气单胞菌噬菌体的分离纯化及生物学特性分析

发布时间：2020-10-17 08:19

　　 嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)在自然界的水体中普遍存在,是水产养殖中非常重要的鱼类病原体。由于抗生素的大量使用及滥用,耐药菌株不断增加,药物残留问题越来越严重,防治该菌感染已成为当今水产养殖业的一大难题。噬菌体(bacteriophage,phage)是一种细菌病毒,具有特异性强、裂解效率高、无残留等特点。因此研究嗜水气单胞菌噬菌体来防控该类疾病具有重要意义。本试验从南京不同地区采集池塘水样5份,污染河流水样2份,普通河流水样3份,利用双层平板法分离嗜水气单胞菌噬菌体,得到25株噬菌体分离株。分离纯化后进行宿主谱的测定,参与检测的有273株气单胞菌。试验中发现,25株噬菌体综合起来能够裂解20株嗜水气单胞菌,2株维氏气单胞菌,1株动物气单胞菌,而且不同噬菌体分离株裂解嗜水气单胞菌的宿主范围有一定的重叠性,说明当前流行的嗜水气单胞菌有其主要的噬菌体型。为进一步了解嗜水气单胞菌噬菌体的生物学特性,本试验选择了性质稳定、宿主范围相对较广的5株噬菌体进行生物学特性分析。研究结果显示,N21、W3和G65属于肌尾噬菌体科,而Y71和Y81属于短尾噬菌体科;噬菌斑除G65外均清楚无晕环,大小无明显差异;5株噬菌体一步生长曲线表明,潜伏期均约为10 min,生长期分别为 70 min、135 min、90 min、105 min 和 105 min,平均裂解量分别为 316 PFU/cell、160PFU/cell、260PFU/cell、200PFU/cell、220PFU/cell。5 株噬菌体均对高温敏感,对pH适应性较广,突变频率在10-6～10-7之间。5株噬菌体的动物试验发现,感染30 min治疗6 h,噬菌体治疗组小鼠的细菌载量均低于感染组,表明5株噬菌体对感染小鼠有治疗作用,其中N21和Y81作用更为显著。综上所述,我们分离了 25株嗜水气单胞菌噬菌体,筛选出宿主谱相对较宽、潜伏期短、裂解率高、理化性质稳定、突变频率低的噬菌体,并通过动物试验来评估噬菌体疗法的安全性和有效性,为噬菌体在临床中的使用奠定了基础。
【学位单位】：南京农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2016
【中图分类】：S942.3
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一篇 文献综述
    第一章 噬菌体及其应用的研究进展
        1 噬菌体的形态结构及分类
            1.1 双股DNA噬菌体
            1.2 单股DNA噬菌体
            1.3 双股RNA噬菌体
            1.4 单股RNA噬菌体
        2 噬菌体生命周期
            2.1 烈性噬菌体的生命周期
            2.2 溶原性噬菌体生命周期
        3 噬菌体和细菌之间的相互作用
            3.1 细菌抵抗噬菌体的感染
            3.2 噬菌体对细菌的防御
        4 噬菌体在细菌性疾病治疗上的现状
            4.1 噬菌体在细菌性疾病治疗上的应用
            4.2 噬菌体在细菌性疾病治疗上的优势
            4.3 噬菌体在细菌性疾病治疗上面临的问题
        5 嗜水汽单胞菌噬菌体研究现状
        参考文献
第二篇 试验研究
    第二章 嗜水气单胞菌噬菌体分离纯化和宿主谱的测定
        1 材料与方法
            1.1 菌株
            1.2 主要试剂和仪器
            1.3 样品的采集
            1.4 噬菌体的分离和纯化
            1.5 噬菌体的保存
            1.6 宿主范围的测定
        2 结果
            2.1 噬菌体的分离和纯化
            2.2 宿主范围
        3 讨论
        参考文献
    第三章 五株嗜水气单胞菌噬菌体生物学特性及动物试验
        1 材料与方法
            1.1 菌株
            1.2 主要试剂和仪器
            1.3 噬菌体形态的电镜观察
            1.4 最适感染复数(MOI)
            1.5 一步生长曲线
            1.6 热稳定性
            1.7 pH稳定性
            1.8 嗜水气单胞菌耐噬菌体的突变频率的测定
            1.9 小鼠模型治疗试验
        2 结果
            2.1 噬菌体的形态
            2.2 最适感染复数
            2.3 一步生长曲线
            2.4 热稳定性
            2.5 pH稳定性
            2.6 嗜水气单胞菌耐噬菌体的突变频率的测定
            2.7 动物试验
        3 讨论
        参考文献
全文总结
致谢

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本文编号：2844532