不同发育期大鲵性腺Sox9、Cyp19、Esr1基因的表达

发布时间：2020-10-28 16:40

　　 大鲵(Andrias davidanus)是我国特有的有尾两栖类,国家Ⅱ级重点保护野生动物。近年来随着大鲵人工繁育技术的突破,大鲵养殖作为一种新兴特种水产养殖业在我国蓬勃发展。已有的研究表明,在幼鲵性腺分化期,用较高水温饲养使大多数幼鲵分化为雄鲵,而在同样的水温条件下,使用适宜浓度的外源17β-雌二醇(17β-E2)处理幼鲵使其又全部诱变成雌鲵。从2012年到2013年,于每年12月初将2000尾幼鲵随机平均分为实验组和对照组,实验组幼鲵使用适宜浓度的外源17β-E2处理40 d。取8、12、20和36月龄大鲵性腺,采用解剖学与一般组织学技术对其进行了性别鉴定。选取了与有尾两栖类性别决定和性腺分化相关的Sox9、Cyp19和Esr1基因,采用RT-PCR技术测定了这些基因的表达变化情况。旨在探寻这些基因在大鲵性别决定和性腺分化中的作用,初步探讨大鲵的性腺分化及性别决定的分子机制,为大鲵产业的可持续健康发展以及大鲵这个古老物种的种族延续提供理论依据。主要结果与结论如下:1.外源17β-E2可以诱导大鲵性腺全部分化为卵巢,且与对照组卵巢相比未见组织学异常。2.首次扩增出了大鲵Cyp19、Esr1基因的部分cDNA序列。3.在8、12、20和36月龄对照组大鲵性腺中,卵巢Sox9基因的表达呈上升趋势,36月龄Sox9基因的表达较其他3个时期极显著升高(P0.01);精巢Sox9基因的表达呈先上升再下降趋势;卵巢Sox9基因表达水平极显著高于相应时期的精巢(P0.01)。表明Sox9基因可能参与了大鲵卵黄的合成过程。4.在8、12、20和36月龄对照组大鲵性腺中,卵巢Cyp19基因的表达水平呈逐渐降低趋势,8月龄Cyp19基因的表达极显著高于其他3个时期(P0.01);精巢Cyp19基因的表达基本呈现上升趋势;卵巢Cyp19基因表达水平极显著高于相应时期的精巢(P0.01)。说明Cyp19基因可能在大鲵的性腺分化和卵巢发育中具有重要作用。5.在8、12、20和36月龄对照组大鲵性腺中,8月龄卵巢Esr1基因的表达极显著高于其他3个时期(P0.01),12、20、36月龄Esr1基因表达呈逐渐上升趋势;精巢Esr1基因始终保持较高的表达水平;除8月龄外,12、20和36月龄精巢Esr1基因表达极显著高于相应时期的卵巢(P0.01)。表明Esr1基因可能参与了卵巢的分化和发育,还可能与卵母细胞发育以及精原细胞形成有关。6.8、12、20月龄实验组与对照组大鲵Sox9、Cyp19、Esr1基因的表达没有显著差异,表明早期用外源17β-E2处理幼鲵后,实验组大鲵没有外源17β-E2的明显残留。
【学位单位】：陕西师范大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2015
【中图分类】：S917.4
【部分图文】：

??积累与ＰＣＲ产物积累同步［９５ｊ?（图１－２）。ＴａｑＭａｎ探针自身具有特异性序列，因而所??检测目的基因特异性强，且其产生的荧光强度与ＰＣＲ产物的量成正比关系，因此准??确性也非常高。ＴａｑＭａｎ探针被用作基因含量的精确检测（精确度可达几十个拷贝）??及表达变化的精确分析（精确度可达０．１倍的变化）。??Ｐｒｉｍｅｒ??！．热－＿?錢離?Ａ＂???；?？?？?ｌ?ｔ?Ｉ????ｔ?Ｉ??２．

图１－３?ＳＹＢＲ?Ｇｒｅｅｎ?Ｉ染料检测原理图??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３?Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｐｒｉｎｃｉｎｐｌｅ?ｏｆ?ＳＹＢＲ?Ｇｒｅｅｎ?Ｉ?ｄｙｅ??－ＰＣＲ过程中，荧光信号可以被探测器即时捕获，ＲＴ－ＰＣＲ仪通曲线，在电脑生成扩增曲线，以表示在整个反应过程中积累ＰＣＲ反应的基线一般是ＰＣＲ的第３￣１５个循环时的荧光信号水段，此时的荧光信号变化极小，为荧光本底信号（ｂａｓｅｌｉｎｅ）。反应的背景，可以消除扩增早期的背景影响。ＲＴ－ＰＣＲ反应的，ＲＴ－ＰＣＲ仪软件通常自动将阈值设置为基线荧光值标准差的水平较基线信号水平有显著的增加。设置阈值的意义在于，从背景中区分出来。循环阈值（Ｃｙｃｌｅ?ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ，Ｃｔ）是在ＰＣ的荧光信号达到阈值时所经过的扩增循环次数，反映在图１－４号与阈值交叉的循环数。Ｃｔ值在指数扩增的起始阶段进行检测呈反比，起始拷贝数越多，Ｃｔ值就越小；反之，模板起始量越此，Ｃｔ值可以被用来计算起始ＤＮＡ的拷贝数［９９＇｜（）（）１。??

在ＲＴ－ＰＣＲ过程中，荧光信号可以被探测器即时捕获，ＲＴ－ＰＣＲ仪通过绘制荧光??与循环数曲线，在电脑生成扩增曲线，以表示在整个反应过程中积累的产物（图??１－４）。ＲＴ－ＰＣＲ反应的基线一般是ＰＣＲ的第３￣１５个循环时的荧光信号水平，处于背??景信号阶段，此时的荧光信号变化极小，为荧光本底信号（ｂａｓｅｌｉｎｅ）。荧光本底信??号相当于反应的背景，可以消除扩增早期的背景影响。ＲＴ－ＰＣＲ反应的阈值位于指??数扩増期，ＲＴ－ＰＣＲ仪软件通常自动将阈值设置为基线荧光值标准差的１０倍，因此??阈值信号水平较基线信号水平有显著的增加。设置阈值的意义在于，它可将相关??扩增信号从背景中区分出来。循环阈值（Ｃｙｃｌｅ?ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ，Ｃｔ）是在ＰＣＲ过程中，??扩增产物的荧光信号达到阈值时所经过的扩增循环次数，反映在图１－４中即为反应??的荧光信号与阈值交叉的循环数。Ｃｔ值在指数扩增的起始阶段进行检测，Ｃｔ值与起??始拷贝量呈反比，起始拷贝数越多，Ｃｔ值就越小；反之，模板起始量越低，Ｃｔ值就??越高。因此，Ｃｔ值可以被用来计算起始ＤＮＡ的拷贝数［９９＇｜（）（）１。??７Ｊ??三．?（??
【参考文献】

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本文编号：2860342