池蝶蚌酶解产物和多糖生物活性功能分析

发布时间：2020-11-17 03:39

　　 池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)隶属于软体动物门、瓣鳃纲,起源于日本,是优质的淡水育珠蚌。当取完珍珠后,其肉质往往被丢弃,未被利用。为了提高池蝶蚌资源利用率,本研究以成熟的池蝶蚌肉质为材料,对其基本营养物质进行分析:新鲜池蝶蚌全脏器含有水分89.68%、粗蛋白5.63%、灰分1.93%、总糖1.24%、粗脂肪0.96%、非蛋白氮0.56%组成。池蝶蚌肉质中糖类和蛋白含量较丰富,为此开展池蝶蚌多糖和酶解相关研究。研究首次选用三种蛋白酶(木瓜蛋白酶、动物蛋白酶、中性蛋白酶)对池蝶蚌全脏器进行酶解,建立相关的工艺流程,获得上述三种酶解产物。并对酶解产物的基本营养成分和18种氨基酸含量进行检测分析。设计体外抗氧化实验,探究其抗氧化能力。研究发现:三种酶解产物均对DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)、羟基自由基和超氧自由基具有清除能力,而且清除效果随着三种酶解产物浓度增加而增强。其中,中性蛋白酶酶解产物对三种指标清除率效果最好。以0.6 mg/mL为例,对DPPH和羟基自由基以及超氧自由基清除率分别为23.8%、37.2%、19.6%,研究表明池蝶蚌酶解产物具有体外抗氧化的能力。实验设计体外乙醇脱氢酶(ADH)激活率、小鼠醉酒实验,探究池蝶蚌三种酶解产物对解酒相关生物活性功能。体外ADH激活率结果表明,3.75-150 mg/mL浓度范围表现出正相关;醉酒实验结果显示:中性蛋白酶酶解产物与模型组相比能够延长耐受时间1.5小时,缩短醉酒时间3小时,以上两种时间均具有显著性差异(p0.01);动物蛋白酶酶解产物与模型组相比延长耐受时间0.5小时和缩短醉酒时间2小时,具有显著性差异(p0.01);木瓜蛋白酶酶解产物组耐受和醉酒时间与模型组相比无显著性差异(p0.05)。结果表明动物、中性蛋白酶酶解产物对解酒有一定的功效。根据体外抗氧化实验、ADH激活率实验和醉酒实验结果,选用池蝶蚌中性蛋白酶酶解产物,设计抗小鼠急性酒精肝损伤实验。研究结果表明:中性蛋白酶酶解产物,在150 mg/kg BW剂量下会显著提高肝脏匀浆中谷胱甘肽(GSH)的含量(p0.01),降低甘油三脂(TG)的含量(p0.01);降低血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的含量(p0.05)。丙二醛(MDA)含量降低虽不显著,但随着酶解产物浓度增加具有一定降低的趋势。根据《保健食品检验与评价判定方法》,肝组织中TG、GSH、MDA任意两者具有阳性,则说明该物质具有辅助保护肝脏的作用。研究结果表明:池蝶蚌中性蛋白酶酶解产物对酒精诱导小鼠急性酒精肝损伤具有一定的缓解保护作用。本实验通过热水乙醇提方式获得池蝶蚌多糖(HSP-1),设计池蝶蚌多糖(HSP-1)抗肿瘤和修复肝损伤实验。选用SMCC-7721和SGC-7901细胞株进行实验,发现池蝶蚌多糖(HSP-1)在低浓度下(100-200μg/m L)对两者细胞生长有促进作用,超过400μg/m L时出现抑制效果,随着HSP-1浓度增加,两种肿瘤抑制率逐步提高,当HSP-1浓度为1000μg/m L,对两种细胞抑制率仅为12%、11%,抑制效果不显著。探究HSP-1抗酒精诱导肝损伤时,HSP-1在250mg/kg BW可以显著降低血清中两种转氨酶的含量,在急性肝损伤和非急性肝损伤(4周)都能体现出很好降低两种转氨酶(p0.01)。小鼠肝脏匀浆中的甘油三酯(TG)含量显著降低(p0.05),谷胱甘肽(GSH)的含量比模型组(只灌胃白酒组)显著升高(p0.05);非急性(4周)肝损伤小鼠肝脏匀浆中MDA含量虽然未显著降低(p0.05),但随着池蝶蚌多糖(HSP-1)浓度的增加,对降低MDA含量趋势月明显。综上述实验结果说明HSP-1对酒精诱导肝损伤具有一定的保护作用。
【学位单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S917.4
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
    1.1 贝类生物活性研究进展
    1.2 多糖生物活性研究现状
        1.2.1 抗氧化活性
        1.2.2 抗肿瘤活性
        1.2.3 保护酒精性肝损伤
    1.3 贝类多糖的研究现状
        1.3.1 海水贝类多糖生物活性研究现状
        1.3.2 淡水贝类多糖生物活性研究现状
    1.4 多糖的提取制备
    1.5 全肉酶解产物生物活性研究
        1.5.1 贝类酶解产物活性研究
        1.5.2 酶解产物解酒研究
        1.5.3 酶解工艺研究
    1.6 本论文研究的目的及意义
第二章 池蝶蚌酶解产物的制备及生物活性探究
    2.1 实验材料
    2.2 实验方法
        2.2.1 池蝶蚌基本营养成分检测
        2.2.2 池蝶蚌酶解产物的制备
        2.2.3 池蝶蚌酶解产物基本营养成分检测
        2.2.4 池蝶蚌酶解产物氨基酸成分分析
        2.2.5 池蝶蚌酶解产物体外抗氧化实验
        2.2.6 池蝶蚌酶解产物体外ADH激活率实验
        2.2.7 醉酒实验
        2.2.8 小鼠急性酒精肝损伤实验
        2.2.9 数据统计分析
    2.3 实验结果
        2.3.1 池蝶蚌及其酶解产物基本营养成分检测
        2.3.2 池蝶蚌三种酶解产物氨基酸成分分析
        2.3.3 池蝶蚌三种酶解产物体外抗氧化活性
        2.3.4 体外检测ADH激活率
        2.3.5 醉酒实验
        2.3.6 急性肝损伤实验
    2.4 讨论
        2.4.1 酶解产物的制备及分析
        2.4.2 酶解产物的抗氧化分析
        2.4.3 酶解产物的解酒护肝分析
第三章 池蝶蚌多糖的提取及生物活性研究
    3.1 实验材料
    3.2 实验方法
        3.2.1 多糖的制备
        3.2.2 HSP-1抗肿瘤活性探究
        3.2.3 HSP-1对酒精诱导的肝损伤影响探究
    3.3 实验结果
        3.3.1 多糖的提取及分离纯化
        3.3.2 HSP-1抑制肿瘤细胞实验
        3.3.3 HSP-1对酒精诱导急性肝损伤实验影响探究
    3.4 讨论
        3.4.1 池蝶蚌多糖HSP-1的提取
        3.4.2 池蝶蚌多糖HSP-1抗肿瘤分析
        3.4.3 池蝶蚌多糖HSP-1修复酒精诱导肝损伤分析
第四章 结论与展望
    4.1 结论
    4.2 展望
致谢
参考文献

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本文编号：2887050