鳗弧菌减毒活疫苗免疫斑马鱼应答的母源性免疫传递和保护作用
发布时间：2020-11-17 04:18
鱼苗发育早期由于免疫组分的缺失在不同鱼种中导致了致命的损失,研究表明通过母源免疫能向子代传递免疫组分并为子代提供一定的保护作用。然而,减毒活疫苗在母源免疫方面的研究十分有限。近期研究发现,通过鳗弧菌(Vibrio anguillarum)活苗刺激大菱鲆(Scophthalmus maximus)亲鱼后,子代免疫因子的母源传递得到了提高。斑马鱼作为一种研究透彻的模式动物,基于其在基因组上的丰富研究及遗传学上的可操作性,成为研究硬骨鱼母源免疫的理想模型。此外,由于斑马鱼发育早期各个时期易于区分,在研究鱼类免疫系统早期发育特症方面也具有很高的价值。本研究使用鳗弧菌减毒活疫苗MVAV6203免疫斑马鱼雌鱼,在免疫后14天进行交配,选取免疫组及对照组亲鱼所产子代,对其不同发育时期杀菌活力进行了检测及比较。将子代匀浆与鳗弧菌野生株MVM425共孵育后发现,实验组子代匀浆相比对照组而言,其对鳗弧菌野生株的杀菌活力有了显著提高。另外在斑马鱼子代发育到第六天时,对幼鱼进行鳗弧菌野生株浸泡感染,通过提取总基因组DNA检测鳗弧菌在幼鱼体内的增殖情况,实验结果表明,实验组幼鱼体内鳗弧菌增殖情况相比对照组存在明显抑制现象。进一步通过RT-qPCR分析转录水平免疫相关因子的表达情况,发现减毒活疫苗免疫亲鱼使子代免疫因子转录水平的表达有很大提高。免疫组所产子代在发育早期固有免疫细胞的标记基因如spi.1, l-plastin, mpx和gata-1表现出明显的表达提前以及表达上调。随后通过二维电泳和间接酶联免疫吸附(ELISA)实验发现,通过减毒活疫苗免疫亲鱼,实验组子代胚胎蛋白表达谱与对照组存在较显著差异,同时总抗体水平明显高于对照组,且受精24小时后,在实验组胚胎中可以检测到抗鳗弧菌、哈维氏弧菌和溶藻弧菌的特异性抗体。而且,通过对上述实验结果的对比分析发现,胚胎及幼鱼相对较高的抗体含量与其相对较高的杀菌活力及抑制菌体繁殖的能力在时相上存在一定的依存关系,暗示了母源传递抗体对子代抗特异性病原菌的保护作用。上述鳗弧菌减毒活疫苗在模式动物斑马鱼上的母源传递研究,为其在水产养殖中免疫防治应用提供了新的思路,也为提高幼鱼品质,突破鱼类养殖业中的幼苗存活率这一主要瓶颈提供了重要理论依据。
【学位单位】：华东理工大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2015
【中图分类】：S948
【部分图文】：
告最新统计数据显示，在全球范围内水产养殖业产量在过去５０年来持续稳步增长Ｗ如图??１．１所示。水产养殖作为食用鱼类的一个重要来源，其产量已经可１＾＾与捕拔业产量相提??并论。近年来，我国作为世界上最大的水产养殖国家，在食用鱼产量，尤其是水产养殖??产量方面显著增加。水产养殖己经成为我国农业生产体系中最为重要的组分，水产养殖??业的发展不仅与农业经济发展息息相关，同时也影响着我们的日常生活，不仅能保障国??家食物安全，更能积极应对气候变化等全球问题Ｗ。??
华东理工大学硕±学位论文?第３页??水的各种养殖和野生鱼类レッ及贝类中，如大西洋蛙、虹轉、大菱钟、妒鱼、真觸、磐鱼、??蜡鱼、香鱼和一些双壳类软体动物等，造成致命性出血败血症，即弧菌病。??从临床表征上来看，弧菌病也被称为盐水巧、煮沸病或溃瘍病。弧菌病的典型症状??包括体重减轻、嗜睡、腹部肿胀、皮肤创伤Ｗ及溃窝和出血（图１．３）。在被感染的鱼体血??液及造血组织中可Ｗ发现高浓度輕弧菌。暧弧菌可通过皮肤感染ｙｘ及口腔摄取等途径感??染鱼类ＵＵ。诱导弧菌病的主要因素包括化学应力如水质、污染和饮食成分，生物应为如??养殖密度、其他微生物的相互影响及物理应为如湿度等。由于媛弧菌的高致病性和发??病率，己有大量学者针对其毒力致病机理进行了研究，虽然发病的机理尚未完全明确，??一些毒力相关因子和基因已得到了鉴定，包括影响细胞趋化的基因、铁摄取系统、脂多??糖Ｗ及具有蛋白水解活性和溶血活性的胞外产物等。??
转录可在之后的１０天ｔｉｓｉ内抑制相关基因的功能，ＭＯ的作巧时长使得其可レッ用于抑制??相关基因调控免疫系统的发育。ＭＯｓ也能通过共注射来抑制不同的基因，从而实现在??活体内检验多个基因的功能。图１．４显示了通过注射Ｇ４剧的ＭＯ后导致的球蛋白产??生减少。该基因技术的在斑马鱼上的应用，为斑马鱼基因功能的研究奠定了基础。??＾７＾?＾＾ＡＡＡＡＡＡＡ??／?ＧＡＴＡ－１?ＭＯ??…－??ｄ２?一?ＷＴ??ｒ?／?ｊｈ????—??Ｉｄ２?ＭＯ??ｇｌｏｂｉｎ??图１．４斑马鱼胚胎中ＭＯ的使用??Ｆｉｇ．?１．４?Ｔｈｅ?ｕｓｅ?ｏｆ?ＭＯｓ?ｉｎ?ｚｅｂｒａ巧ｓｈ?ｅｍｂｒｙｏｓ．??通过建立表达巧光蛋白的转基因斑马鱼也可１＾用来确定血细胞系。其中一些转基因??
【参考文献】
本文编号：2887083
【学位单位】：华东理工大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2015
【中图分类】：S948
【部分图文】：
告最新统计数据显示，在全球范围内水产养殖业产量在过去５０年来持续稳步增长Ｗ如图??１．１所示。水产养殖作为食用鱼类的一个重要来源，其产量已经可１＾＾与捕拔业产量相提??并论。近年来，我国作为世界上最大的水产养殖国家，在食用鱼产量，尤其是水产养殖??产量方面显著增加。水产养殖己经成为我国农业生产体系中最为重要的组分，水产养殖??业的发展不仅与农业经济发展息息相关，同时也影响着我们的日常生活，不仅能保障国??家食物安全，更能积极应对气候变化等全球问题Ｗ。??
华东理工大学硕±学位论文?第３页??水的各种养殖和野生鱼类レッ及贝类中，如大西洋蛙、虹轉、大菱钟、妒鱼、真觸、磐鱼、??蜡鱼、香鱼和一些双壳类软体动物等，造成致命性出血败血症，即弧菌病。??从临床表征上来看，弧菌病也被称为盐水巧、煮沸病或溃瘍病。弧菌病的典型症状??包括体重减轻、嗜睡、腹部肿胀、皮肤创伤Ｗ及溃窝和出血（图１．３）。在被感染的鱼体血??液及造血组织中可Ｗ发现高浓度輕弧菌。暧弧菌可通过皮肤感染ｙｘ及口腔摄取等途径感??染鱼类ＵＵ。诱导弧菌病的主要因素包括化学应力如水质、污染和饮食成分，生物应为如??养殖密度、其他微生物的相互影响及物理应为如湿度等。由于媛弧菌的高致病性和发??病率，己有大量学者针对其毒力致病机理进行了研究，虽然发病的机理尚未完全明确，??一些毒力相关因子和基因已得到了鉴定，包括影响细胞趋化的基因、铁摄取系统、脂多??糖Ｗ及具有蛋白水解活性和溶血活性的胞外产物等。??
转录可在之后的１０天ｔｉｓｉ内抑制相关基因的功能，ＭＯ的作巧时长使得其可レッ用于抑制??相关基因调控免疫系统的发育。ＭＯｓ也能通过共注射来抑制不同的基因，从而实现在??活体内检验多个基因的功能。图１．４显示了通过注射Ｇ４剧的ＭＯ后导致的球蛋白产??生减少。该基因技术的在斑马鱼上的应用，为斑马鱼基因功能的研究奠定了基础。??＾７＾?＾＾ＡＡＡＡＡＡＡ??／?ＧＡＴＡ－１?ＭＯ??…－??ｄ２?一?ＷＴ??ｒ?／?ｊｈ????—??Ｉｄ２?ＭＯ??ｇｌｏｂｉｎ??图１．４斑马鱼胚胎中ＭＯ的使用??Ｆｉｇ．?１．４?Ｔｈｅ?ｕｓｅ?ｏｆ?ＭＯｓ?ｉｎ?ｚｅｂｒａ巧ｓｈ?ｅｍｂｒｙｏｓ．??通过建立表达巧光蛋白的转基因斑马鱼也可１＾用来确定血细胞系。其中一些转基因??
【参考文献】
相关期刊论文 前2条
1 郭秀平;邓国成;杨小静;;我国现行水产养殖动物使用国标兽药的种类[J];海洋与渔业;2014年03期
2 唐启升;丁晓明;刘世禄;王清印;聂品;何建国;麦康森;徐皓;林洪;金显仕;张国范;杨宁生;;我国水产养殖业绿色、可持续发展保障措施与政策建议[J];中国渔业经济;2014年02期
本文编号：2887083
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