尼罗罗非鱼dnd和aldhla2基因在生殖细胞发育过程中的功能研究

发布时间：2021-03-04 05:09

　　原始生殖细胞（Primordial germ cells,PGCs）经过迁移进入生殖腺原基后,经过增殖、分化为精原细胞和卵原细胞。鱼类生殖细胞在性别分化过程中起到了重要作用,以尼罗罗非鱼（Oreochromis niloticus）作为研究鱼类性别决定与分化的实验动物,研究生殖细胞有助于从另一角度阐明其性别决定与分化的机制。dnd（dead end）同vasa基因一样是生殖细胞的标记基因,对于脊椎动物PGCs的发育和配子生成有重要作用。在PGCs分化为卵原细胞和精原细胞之后需进行减数分裂产生卵子和精子,然而在不同物种,雌、雄生殖细胞减数分裂起始时间是不同的,这一过程对其生殖发育有着重要的作用。多年的研究证实了视黄酸（Retinoic acid,RA）信号通路在减数分裂起始中有重要作用,Stra8（Stimulated by retinoic acid gene8）是这一信号通路中的关键因子。然而这一机制仅在四足动物中如哺乳类、鸟类和两栖类得到证实,RA信号通路在硬骨鱼类生殖细胞减数分裂起始过程中的作用还有待阐明。本实验室首次报道南方鲇中存在Stra8并证实RA可能参与硬骨鱼类减数分裂起... 

【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

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英文缩略词
摘要
Abstract
第1章 文献综述
    1 鱼类的性别决定和性别分化概述
    2 鱼类生殖细胞的发育
        2.1 鱼类PGCs
        2.2 鱼类PGCs在性别分化过程中作用
    3 生殖细胞分子标记概述
    4 生殖细胞减数分裂的调控机制概述
        4.1 RA起始减数分裂的研究进展
        4.2 RA合成酶——Aldh1a家族
    5 科学问题的提出和本研究的目的意义
第2章 dnd在尼罗罗非鱼生殖细胞发育中的功能研究
    1 引言
    2 材料与方法
        2.1 实验动物
        2.2 试剂、耗材和仪器
        2.3 有关试剂的配制
        2.4 氨基酸序列比对分析
        2.5 罗非鱼dnd性腺转录组分析
        2.6 罗非鱼dnd组织表达模式分析
        2.7 罗非鱼dnd CRISPR/Cas9敲除
    3 结果与分析
        3.1 dnd氨基酸同源性分析
        3.2 罗非鱼dnd性腺转录组分析
        3.3 dnd在罗非鱼成鱼不同组织表达模式分析
        3.4 罗非鱼dnd CRISPR/Cas9敲除靶位点的选择及突变检测
        3.5 dnd敲除影响性腺生殖细胞的正常发育
        3.6 dnd敲除鱼的免疫组织化学分析
    4 讨论
第3章 RA合成酶aldh1a2在尼罗罗非鱼生殖细胞发育中的调控研究
    1 引言
    2 材料与方法
        2.1 材料
        2.2 药物处理
        2.3 罗非鱼aldh1a2多克隆抗体免疫组织化学检测
        2.4 DEAB处理鱼的取材及组织学和免疫组织化学检测
        2.5 罗非鱼aldh1a2 CRISPR/Cas9敲除
    3 结果与分析
        3.1 罗非鱼aldh1a2在XX和XY性腺发育过程中表达
        3.2 罗非鱼aldh1a2 CRISPR/Cas9敲除靶位点的选择及突变检测
        3.3 DEAB处理鱼和aldh1a2敲除鱼卵巢发育组织学观察
        3.4 生殖细胞缺失时Aldh1a2表达情况
    4 讨论
结论
参考文献
致谢
在读期间发表论文情况
在读期间参加科研情况



本文编号：3062619