若干斑马鱼转基因品系的建立及其初步功能研究

发布时间：2021-04-18 02:22

　　心脏形成是一个错综复杂的过程,信号途径与转录因子和粘附分子对心脏细胞增殖、分化,心脏细胞的多样性以及不同心脏细胞的形态发生起调控作用。通过构建心脏组织高表达基因启动子和增强子的转基因品系来确定基因的生物学功能,对理解心脏发育的机制和发展有效地治疗手段奠定了理论基础。GFP和RFP可在不同物种中作为活体报告基因,真实地追踪基因的表达和蛋白质的定位,,因此可用于研究基因对心脏发育的调控功能。To12是发现于青鳉中的一个鱼源转座系统,利用To12转座酶系统构建转基因斑马鱼品系能显著提高转基因成功的效率,该To12转座子系统为斑马鱼心脏发育候选基因的功能研究提供了很大方便。HDGC3基因是本研究室筛选鉴定的一个在心脏和肌肉中高表达的心脏发育候选基因。本室前期研究结果表明HDGC3在斑马鱼的心脏和肌肉组织中有高水平的表达,为了进一步研究HDGC3在心脏发育过程中的功能,本文基于To12转基因技术,建立了若干心脏转基因斑马鱼模型。我们分别利用斑马鱼cmlc2和Titin启动子构建了转基因表达载体pTo12（cmlc2:HDGC3-EGFP）和pTo12（Titin: HDGC3-EGFP）,将这两... 

【文章来源】：湖南师范大学湖南省 211工程院校

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
1 前言
    1.1 斑马鱼
    1.2 斑马鱼转基因概述
        1.2.1 转基因技术
        1.2.2 Tol2转座子系统
        1.2.3 Gateway克隆技术
    1.3 斑马鱼心血管发育及调控机理
        1.3.1 斑马鱼心血管发育过程
        1.3.2 斑马鱼心血管发育的分子调控机制
        1.3.3 HDGC3与心脏发育
    1.4 本课题的研究意义、内容和目的
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌株
        2.1.2 质粒
        2.1.3 斑马鱼品系
        2.1.4 主要试剂、酶和试剂盒
        2.1.5 主要耗材及仪器
        2.1.6 主要是试剂的配制
    2.2 方法
        2.2.1 分子克隆
        2.2.2 转基因斑马鱼的构建
3 结果与分析
    3.1 pTol2（cmlc2：HDGC3-EGFP）表达载体的构建及其表达分析..
        3.1.1 pTol2（cmlc2：HDGC3-EGFP）表达载体的构建
        3.1.2 pTol2（cmlc2：HDGC3-EGFP）表达载体的表达分析
    3.2 pTol2（HDGC3：EGFP）表达载体的构建及其表达分析
        3.2.1 pTol2（HDGC3：EGFP）表达载体的构建
        3.2.2 pTol2（HDGC3：EGFP）表达载体的表达分析
    3.3 pTol2（Titin：HDGC3-EGFP）表达载体的构建及其表达分析
        3.3.1 pTol2（Titin：HDGC3-EGFP）表达载体的构建
        3.3.2 pTol2（Titin：HDGC3-EGFP）表达载体的表达分析
    3.4 HSP-FLP重组质粒的构建及其表达分析
        3.4.1 pMD18-T-FLP克隆载体鉴定
        3.4.2 HSP-FLP-EGFP表达载体的鉴定
        3.4.3 pTol2-HSP-FLP-ires-EGFP表达载体的鉴定
        3.4.4 pTol2-HSP-FLP-EGFP重组表达载体显微注射验证
        3.4.5 HSP-FLP重组蛋白表达载体的表达分析
        3.4.6 HSP-FLP重组蛋白表达载体转基因斑马鱼的鉴定
4 讨论
    4.1 绿色荧光蛋白
    4.2 利用Tol2构建的转基因斑马鱼
    4.3 启动子诱捕方法在模式生物中的潜在应用
    4.4 关于Gateway重组系统
    4.5 构建转基因斑马鱼的意义
5 结语
6 其他工作
    6.1 重组质粒pET-28a-Dnajb6b的构建与鉴定
    6.2 Dnajb6b融合蛋白诱导表达及纯化
    6.3 Dnajb6b基因蛋白的多克隆抗体的制备与特异性检测
    6.4 Dnajb6b基因蛋白在斑马鱼不同发育时期的表达
参考文献
附录一
附录二
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]利用GATA-2调控成分制备组织特异性表达GFP的转基因斑马鱼[J]. 孟安明,林硕.  科学通报. 1999(21)
[2]转基因鱼模型的建立[J]. 朱作言,许克圣,谢岳峰,李国华,何玲.  中国科学（B辑 化学 生命科学 地学）. 1989(02)



本文编号：3144606