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草鱼IRF8对IFNI转录调控的分子机理

发布时间:2021-08-06 09:59
  IRF8(Interferon regulatory factors 8)和IRF2都是干扰素调节因子家族成员。IRF8拥有一个高度保守的N端DNA结合结构域(DBD)以及一个保守度较低的C末端的IRF关联结构域(IAD)。IRF8在细胞生长分化、肿瘤发生和先天免疫过程中扮演着十分重要的角色。IRF2包含三个结构域:N末端DBD区域、C末端IAD2区域、TRD区域。IRF2也能调节细胞的发育分化,并受干扰素的诱导表达,在先天免疫中发挥重要作用。在病毒刺激的免疫基因的转录调控中,IRF8与IRF2相互作用形成复合物,复合物通过与IRF1竞争ISRE元件上的结合位点,调控下游基因的表达。为了研究草鱼IRF8(CiIRF8)和IRF2(CiIRF2)在基因表达调控中的作用,我们用Q-PCR分析CiIRF8和CiIRF2的表达。结果显示,CiIRF8与CiIRF2在草鱼脑、眼、肠、鳃、皮肤、肝、脾、肾各组织中都有表达,Poly I:C刺激后,CiIRF8与CiIRF2在各组织中的表达量均有上调,但反应程度和诱导时间不同。其中CiIRF8在脑、眼、肠、皮肤、肝、脾、肾七大组织中6 h表达量达到峰... 

【文章来源】:南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】:57 页

【学位级别】:硕士

【部分图文】:

草鱼IRF8对IFNI转录调控的分子机理


图3.1?C/IRF8的组织表达??Fig.3.1?Tissue?expression?patterns?of?C/IRF8??

草鱼IRF8对IFNI转录调控的分子机理


图3.2?C71RF2的组织表达??Fig.?3.2?Tissue?expression?patterns?of?C/IRF2??

均匀分布,草鱼,细胞,蛋白


?第三章实验结果与分析???1”??!?1?”??1?1??c?§???2?1.0-?I?2.??o.o-l ̄■■—_?〇-* ̄^??—A—"丨?_丨丨ri,n>—??,?,?,?,??(A)?(B)??N.C?C7IRF8??mmmm?ifn??’續形赞鄉物想游物哪)賺幽^?>■?r?:-::y..??GAPDH??(C)??图3.5敲降草鱼丨RF8上调CVIFN的表达??Fig.?3.5?Knockdown?of?C/IRF8?up-regulates?C/IFN?expression.??向6孔培养板中接入CIK细胞培养,8h后将2^lgsiRNA-C/lRF8、2^ig^J.C分别转染??进CIK细胞中。其中N.C为阴性对照。转染24?h后分别提取各孔细胞的总RNA和总蛋白??质,荧光定量PCR及蛋白免疫印迹实验分别检测C/IRF8的mRNA(A)、C71FNmRNA(B)??和蛋白(C),我们以p-actin作为Q-PCR的空白对照组,以GAPDH作为Western?blot的阳??性对照内参。??3.3?C7IRF8与C7IRF2的亚细胞定位分析??为了进一步了解C/IRF8的生物学功能,亚细胞定位分析了?C/IRF8和??C7IRF2在细胞中分布的位置,并且选取pEGFP-Cl空载质粒作为阴性对照组。??如图3.6所示,亚细胞定位结果表明,C/1RF2定位结果显示其主要分布于细胞??核中,而C7IRF8定位结果显示细胞核和细胞质中C/1RF8均匀分布。再加入??poly?I:C刺激12?h后我们发现,C7IRF8定位结果显示细胞核中荧光强度明显高??于细胞质

【参考文献】:
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博士论文
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[6]含CCT基序的寡核苷酸对TLR7/9介导的天然免疫应答的抑制作用[D]. 孙然.吉林大学 2009

硕士论文
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[3]大菱鲆干扰素调节因子8(IRF-8)以及褐牙鲆IRF-2和IRF-8的分子特征及其诱导表达分析[D]. 陈晓玲.中国海洋大学 2013
[4]草鱼IRF-2、IRF-3基因的克隆、鉴定及IRF-1的功能分析[D]. 赖启南.南昌大学 2013
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本文编号:3325564

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