靶向定位于鱼类细胞线粒体的鰤鱼诺卡氏菌谷氨酰内肽酶的功能研究
发布时间：2021-08-26 00:01
我国是水产养殖大国,在水产养殖业蓬勃发展的同时,水生动物病害给水产养殖行业蒙上阴影。近年来鱼类诺卡氏菌病已经成为水产养殖业中的严重病害,当水产动物体质虚弱、免疫力低下时,病原菌可通过鳃、饲料或者伤口等进行感染。病鱼表现为腹部膨大,内脏器官常弥漫性分布有致密肉芽肿,该病的感染率和死亡率都比较高,目前尚缺乏有效的防治措施,给水产养殖行业带来巨大损失。近年来鰤鱼诺卡氏菌（Nocardia seriolae）已成为鱼类诺卡氏菌病的主要病原,约39种海淡水养殖鱼种深受其害,然而关于鰤鱼诺卡氏菌的致病机理及其毒力因子目前尚不明确。通过对鰤鱼诺卡氏菌ZJ0503全基因组进行分析,预测ORF6296编码一种谷氨酰内肽酶（Glutamyl endopeptidase）同源类似物,命名该蛋白为Glu NS。生物信息学分析Glu NS是鰤鱼诺卡氏菌的潜在分泌型毒力因子。本研究克隆了Glu NS基因,并对其功能进行分析;对鰤鱼诺卡氏菌胞外产物进行了质谱鉴定;构建了Glu NS基因的亚细胞定位和过表达重组质粒,研究Glu NS在鱼类细胞中的亚细胞定位和致病功能;利用同源重组构建Glu NS基因缺失株和回补株,探...
【文章来源】：广东海洋大学广东省
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
鰤鱼诺卡氏菌GluNS核酸序列及其推导的氨基酸序列
靶向定位于鱼类细胞线粒体的鰤鱼诺卡氏菌谷氨酰内肽酶的功能研究12AGluNSStreptomyces组合BGluNSN.concava组合图2-2GluNS蛋白的三维结构预测分析A：RMS=0.954(850-850原子)；B：RMS=9.036(1219-1219原子)Fig.2-2Predictionofthethree-dimensionalstructureofGluNSproteinA：RMS=0.954(850to850atoms)；B：RMS=9.036(1219to1219atoms)通过GenBank进行同源搜索，用亲缘关系比较近的9种放线菌目细菌的GluNS同源类似物进行序列比对（图2-3）。结果显示，100%相似的氨基酸位点比较少（7%），相似度>60%的氨基酸序列占39.2%，表明谷氨酰内肽酶在进化上缺乏十分保守的氨基酸。GluNS的推定氨基酸序列与N.concava、N.salmonicida、N.asteroides、Rhodococcuskunmingensis、R.opacus、Mycobacteriumabscessus、Streptomycescoelicolor和M.tuberculosis的同源性分别为93、67、66、49、48、40、32和26%。利用鰤鱼诺卡氏菌GluNS氨基酸序列构建系统进化树，如图2-4所示谷氨酰内肽酶在革兰氏阳性菌和病毒均有报道。鰤鱼诺卡氏菌的GluNS先和诺卡氏菌属的细菌聚为一枝，然后与链霉菌属、分枝杆菌属、产酶溶杆菌属的革兰氏阳性菌相聚。有趣的是，接着会倾向于先和来源于病毒（甲肝病毒、人星状病毒、田菁属花叶病毒、猪传染性胃肠炎冠状病毒）的同源类似物相聚，而葡萄球菌属、芽孢杆菌属、肠球菌属的革兰氏阳性菌则在另外聚为一个分枝，表明鰤鱼诺卡氏菌谷氨酰内肽酶GluNS与链霉菌属亲缘关系较葡萄球菌属、芽孢杆菌属高。细菌的谷氨酰内肽酶可以分成三种：葡萄球菌组、芽孢杆菌组和链霉菌组，GluNS应该是链霉菌组谷氨酰内肽酶。
靶向定位于鱼类细胞线粒体的鰤鱼诺卡氏菌谷氨酰内肽酶的功能研究12AGluNSStreptomyces组合BGluNSN.concava组合图2-2GluNS蛋白的三维结构预测分析A：RMS=0.954(850-850原子)；B：RMS=9.036(1219-1219原子)Fig.2-2Predictionofthethree-dimensionalstructureofGluNSproteinA：RMS=0.954(850to850atoms)；B：RMS=9.036(1219to1219atoms)通过GenBank进行同源搜索，用亲缘关系比较近的9种放线菌目细菌的GluNS同源类似物进行序列比对（图2-3）。结果显示，100%相似的氨基酸位点比较少（7%），相似度>60%的氨基酸序列占39.2%，表明谷氨酰内肽酶在进化上缺乏十分保守的氨基酸。GluNS的推定氨基酸序列与N.concava、N.salmonicida、N.asteroides、Rhodococcuskunmingensis、R.opacus、Mycobacteriumabscessus、Streptomycescoelicolor和M.tuberculosis的同源性分别为93、67、66、49、48、40、32和26%。利用鰤鱼诺卡氏菌GluNS氨基酸序列构建系统进化树，如图2-4所示谷氨酰内肽酶在革兰氏阳性菌和病毒均有报道。鰤鱼诺卡氏菌的GluNS先和诺卡氏菌属的细菌聚为一枝，然后与链霉菌属、分枝杆菌属、产酶溶杆菌属的革兰氏阳性菌相聚。有趣的是，接着会倾向于先和来源于病毒（甲肝病毒、人星状病毒、田菁属花叶病毒、猪传染性胃肠炎冠状病毒）的同源类似物相聚，而葡萄球菌属、芽孢杆菌属、肠球菌属的革兰氏阳性菌则在另外聚为一个分枝，表明鰤鱼诺卡氏菌谷氨酰内肽酶GluNS与链霉菌属亲缘关系较葡萄球菌属、芽孢杆菌属高。细菌的谷氨酰内肽酶可以分成三种：葡萄球菌组、芽孢杆菌组和链霉菌组，GluNS应该是链霉菌组谷氨酰内肽酶。
本文编号：3363127
【文章来源】：广东海洋大学广东省
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
鰤鱼诺卡氏菌GluNS核酸序列及其推导的氨基酸序列
靶向定位于鱼类细胞线粒体的鰤鱼诺卡氏菌谷氨酰内肽酶的功能研究12AGluNSStreptomyces组合BGluNSN.concava组合图2-2GluNS蛋白的三维结构预测分析A：RMS=0.954(850-850原子)；B：RMS=9.036(1219-1219原子)Fig.2-2Predictionofthethree-dimensionalstructureofGluNSproteinA：RMS=0.954(850to850atoms)；B：RMS=9.036(1219to1219atoms)通过GenBank进行同源搜索，用亲缘关系比较近的9种放线菌目细菌的GluNS同源类似物进行序列比对（图2-3）。结果显示，100%相似的氨基酸位点比较少（7%），相似度>60%的氨基酸序列占39.2%，表明谷氨酰内肽酶在进化上缺乏十分保守的氨基酸。GluNS的推定氨基酸序列与N.concava、N.salmonicida、N.asteroides、Rhodococcuskunmingensis、R.opacus、Mycobacteriumabscessus、Streptomycescoelicolor和M.tuberculosis的同源性分别为93、67、66、49、48、40、32和26%。利用鰤鱼诺卡氏菌GluNS氨基酸序列构建系统进化树，如图2-4所示谷氨酰内肽酶在革兰氏阳性菌和病毒均有报道。鰤鱼诺卡氏菌的GluNS先和诺卡氏菌属的细菌聚为一枝，然后与链霉菌属、分枝杆菌属、产酶溶杆菌属的革兰氏阳性菌相聚。有趣的是，接着会倾向于先和来源于病毒（甲肝病毒、人星状病毒、田菁属花叶病毒、猪传染性胃肠炎冠状病毒）的同源类似物相聚，而葡萄球菌属、芽孢杆菌属、肠球菌属的革兰氏阳性菌则在另外聚为一个分枝，表明鰤鱼诺卡氏菌谷氨酰内肽酶GluNS与链霉菌属亲缘关系较葡萄球菌属、芽孢杆菌属高。细菌的谷氨酰内肽酶可以分成三种：葡萄球菌组、芽孢杆菌组和链霉菌组，GluNS应该是链霉菌组谷氨酰内肽酶。
靶向定位于鱼类细胞线粒体的鰤鱼诺卡氏菌谷氨酰内肽酶的功能研究12AGluNSStreptomyces组合BGluNSN.concava组合图2-2GluNS蛋白的三维结构预测分析A：RMS=0.954(850-850原子)；B：RMS=9.036(1219-1219原子)Fig.2-2Predictionofthethree-dimensionalstructureofGluNSproteinA：RMS=0.954(850to850atoms)；B：RMS=9.036(1219to1219atoms)通过GenBank进行同源搜索，用亲缘关系比较近的9种放线菌目细菌的GluNS同源类似物进行序列比对（图2-3）。结果显示，100%相似的氨基酸位点比较少（7%），相似度>60%的氨基酸序列占39.2%，表明谷氨酰内肽酶在进化上缺乏十分保守的氨基酸。GluNS的推定氨基酸序列与N.concava、N.salmonicida、N.asteroides、Rhodococcuskunmingensis、R.opacus、Mycobacteriumabscessus、Streptomycescoelicolor和M.tuberculosis的同源性分别为93、67、66、49、48、40、32和26%。利用鰤鱼诺卡氏菌GluNS氨基酸序列构建系统进化树，如图2-4所示谷氨酰内肽酶在革兰氏阳性菌和病毒均有报道。鰤鱼诺卡氏菌的GluNS先和诺卡氏菌属的细菌聚为一枝，然后与链霉菌属、分枝杆菌属、产酶溶杆菌属的革兰氏阳性菌相聚。有趣的是，接着会倾向于先和来源于病毒（甲肝病毒、人星状病毒、田菁属花叶病毒、猪传染性胃肠炎冠状病毒）的同源类似物相聚，而葡萄球菌属、芽孢杆菌属、肠球菌属的革兰氏阳性菌则在另外聚为一个分枝，表明鰤鱼诺卡氏菌谷氨酰内肽酶GluNS与链霉菌属亲缘关系较葡萄球菌属、芽孢杆菌属高。细菌的谷氨酰内肽酶可以分成三种：葡萄球菌组、芽孢杆菌组和链霉菌组，GluNS应该是链霉菌组谷氨酰内肽酶。
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