两种大鲵病原菌的分离鉴定及其理化特性研究

发布时间：2021-09-03 18:05

　　近年来大鲵养殖过程中疾病频发,给养殖户带来了巨大的经济损失,从重庆某养殖场获得的患病大鲵的肝脏、心脏中分离出两株病原菌K4L1和CH6,经人工回归感染实验确定其致病性,通过形态学特征、细菌生理生化特性及分子生物学方法进行鉴定,并测定其胞外产物酶活性。结果显示,分离出的两株病原菌按照生理生化鉴定与16S rDNA系统发育分析确定为弗氏柠檬酸杆菌和嗜水气单胞菌;致病菌株可引起健康蝾螈、青蛙、大鲵出现与自然发病症状相似的感染症状;胞外酶活性发现弗氏柠檬酸杆菌有卵磷脂酶和淀粉酶活性,不产生蛋白酶、脂酶、明胶酶及脲酶;而嗜水气单胞菌具有溶血性,产生卵磷脂酶、脂酶、蛋白酶,没有检测到淀粉酶和脲酶的活性。由此可以得出结论,引起此大鲵发病的病原菌是弗氏柠檬酸杆菌与嗜水气单胞菌,对大鲵有很强的致病性。本文从抗生素、中草药和消毒剂三个方面对大鲵致病菌的理化特性进行研究,为大鲵疾病的预防与治疗提供理论依据。采用纸片扩散法测定了病原菌株对30种抗生药物的敏感性,实验结果表明,大鲵源弗氏柠檬酸杆菌对头孢曲松、头孢唑酮和头孢他啶高度敏感;对多粘菌素B、新霉素、庆大霉素中度敏感,对剩余24种抗生素均呈耐药性,耐药率... 

【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：86 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文章综述
    1.1 大鲵的生物学习性及人工养殖研究
        1.1.1 大鲵生物学习性
        1.1.2 大鲵的人工养殖
    1.2 大鲵的致病因素及主要病害
        1.2.1 大鲵的发病原因
        1.2.2 常见大鲵疾病
    1.3 大鲵病害防治研究概述
        1.3.1 消毒剂
        1.3.2 抗生素
        1.3.3 中草药
    1.4 研究目的与意义
第二章 引言
第三章 大鲵病原菌的分离鉴定
    3.1 材料与试剂
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 主要试剂
        3.1.3 实验仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 病原菌分离与形态观察
        3.2.2 病原菌生理生化鉴定
        3.2.3 DNA模板的提取
        3.2.4 基因组DNA的检测
        3.2.5 引物设计与合成
        3.2.6 16S rDNA目的片段的PCR扩增
        3.2.7 琼脂糖凝胶电泳
        3.2.8 测序并构建 16S rDNA基因系统发育进化树
        3.2.9 人工感染实验
        3.2.10 胞外酶活性检测
    3.3 结果与分析
        3.3.1 菌株形态特征分析
        3.3.2 生理生化结果
        3.3.3 16SrDNA序列分析及系统发育分析
        3.3.4 人工感染结果
        3.3.5 胞外产物酶活性
    3.4 讨论
第四章 大鲵病原菌的敏感药物筛选
    4.1 材料与试剂
        4.1.1 供试菌
        4.1.2 主要试剂
        4.1.3 实验仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 病原菌菌悬液的制备
        4.2.2 大鲵病原菌对抗生素的敏感性实验
    4.3 结果与分析
        4.3.1 菌株K4L1对抗生素的敏感性
        4.3.2 菌株CH6对抗生素的敏感性
    4.4 讨论
第五章 中草药对大鲵病原菌的抑制作用研究
    5.1 材料与试剂
        5.1.1 实验材料
        5.1.2 主要试剂
        5.1.3 实验仪器
    5.2 实验方法
        5.2.1 中草药母液的制备
        5.2.2 病原菌菌悬液的制备
        5.2.3 体外抑菌效果的测定
        5.2.4 最小抑菌浓度和最小杀菌浓度的测定
        5.2.5 中草药联用抑菌实验
    5.3 结果与分析
        5.3.1 中草药抑菌圈的测定
        5.3.2 中草药抑菌效果随作用时间的变化
        5.3.3 中草药抑菌效果随熬制后使用时间的变化
        5.3.4 中草药最小抑菌浓度及最小杀菌浓度
        5.3.5 中草药二联复方的抑制作用评价
    5.4 讨论
第六章 消毒剂对大鲵病原菌的抑制作用研究
    6.1 材料与试剂
        6.1.1 供试菌
        6.1.2 主要试剂
        6.1.3 实验仪器
    6.2 实验方法
        6.2.1 消毒剂的配制
        6.2.2 病原菌菌悬液的制备
        6.2.3 不同浓度消毒剂抑菌效果的测定
        6.2.4 消毒剂最小抑菌浓度和最小杀菌浓度的测定
        6.2.5 中和剂选定
        6.2.6 消毒剂消毒效果评价
        6.2.7 消毒剂联用抑菌实验
    6.3 结果与分析
        6.3.1 不同浓度消毒剂抑菌圈的测定
        6.3.2 消毒剂最小抑菌浓度及最小杀菌浓度
        6.3.3 中和剂选定结果
        6.3.4 消毒剂消毒效果评价
        6.3.5 消毒剂二联复方的抑菌作用评价
    6.4 讨论
第七章 结论
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表论文及参与科研项目



本文编号：3381597