草鱼HMGB2蛋白抗病毒功能及其动态亚细胞定位诱导机制研究

发布时间：2021-12-17 13:34

　　高迁移率族蛋白2（High-mobility group box 2,HMGB2）是一类非组蛋白染色质结合蛋白。其参与很多生理过程,如转录调控、DNA修复、重组、分化以及胞外信号转导等。新近的研究表明,哺乳动物HMGB2可识别病毒DNA,从而在核酸调节的抗病毒先天免疫应答中发挥“哨兵”作用。然而,到目前为止,对于鱼类HMGB2在抗病毒免疫应答中的作用知之甚少。草鱼（Ctenopharyngodon idella）是我国重要的淡水养殖鱼类,然而,由草鱼出血病病毒（Grass carp reovirus,GCRV）引起的草鱼出血病给草鱼养殖业带来了重大的经济损失。本研究克隆了Ci HMGB2a和Ci HMGB2b的c DNA全长序列,初步研究了其抗病毒免疫功能并揭示了其动态亚细胞定位调控机制。取得的主要结果包括:1.Ci HMGB2a和Ci HMGB2b的c DNA均编码213个氨基酸,包含2个N端的box结构域和1个C端尾巴结构域。2.Ci HMGB2a和Ci HMGB2b在草鱼组织中广泛表达;而GCRV感染引起了Ci HMGB2a和Ci HMGB2b在脾脏和头肾组织中显著上调。3.在C... 

【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 草鱼出血病概述
        1.1.1 草鱼养殖概况
        1.1.2 草鱼养殖概况草鱼出血病及其防治策略
    1.2 鱼类先天性免疫概述
        1.2.1 先天性免疫的模式识别受体
        1.2.2 IFN调节的信号转导
        1.2.3 HMGBs
    1.3 研究的目的和意义
        1.3.1 本研究的目的
        1.3.2 本研究的意义
第二章 草鱼HMGB2蛋白抗病毒功能及其动态亚细胞定位诱导机制研究
    2.1 前言
    2.2 材料和方法
        2.2.1 实验材料
        2.2.2 RNA提取与c DNA合成
        2.2.3 引物设计
        2.2.4 Ci HMGB2a/b全长c DNA克隆
        2.2.5 组织样品采集
        2.2.6 载体构建
        2.2.7 细胞转染、筛选与病毒刺激
        2.2.8 实时荧光定量检测相应基因的表达
        2.2.9 抗病毒活性试验
        2.2.10 实验材料共聚焦荧光显微镜检测亚细胞定位
        2.2.11 实验材料活细胞工作站检测
        2.2.12 实验材料蛋白提取和WB试验
    2.3 结果
        2.3.1 全长Ci HMGB2a、Ci HMGB2b的序列分析
        2.3.2 Ci HMGB2a和Ci HMGB2b的组织分布
        2.3.3 GCRV感染后Ci HMGB2a和Ci HMGB2b在脾脏和头肾组织中的时序表达
        2.3.4 Ci HMGB2a和Ci HMGB2b过表达对Ci TRIF, Ci IPS-1, Ci My D88, Ci IFN-I, Ci Mx1应对GCRV刺激的影响
        2.3.5 Ci HMGB2a和Ci HMGB2b的抗病毒活性
        2.3.6 Ci HMGB2a和Ci HMGB2b的亚细胞定位
        2.3.7 GCRV感染引起Ci HMGB2a和Ci HMGB2b的核质迁移
        2.3.8 活细胞工作站检测Ci HMGB2b的核质迁移现象
        2.3.9 Ci HMGB2b结构域及其嵌合体的亚细胞定位
        2.3.10 GCRV刺激对Ci HMGB2b结构域和嵌合体蛋白亚细胞定位的影响
    2.4 讨论
结论
参考文献
附录
缩略词
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]草鱼呼肠孤病毒分子生物学研究进展[J]. 李永刚,曾伟伟,王庆,殷亮,王英英,石存斌,吴淑勤.  动物医学进展. 2013(04)
[2]草鱼出血病基因疫苗的免疫效果[J]. 邹勇,徐诗英,李婧慧,薛仁宇.  水产养殖. 2011(10)
[3]化学合成小干扰RNA分子高效抑制草鱼呼肠孤病毒复制[J]. 李兵,范玉顶,李艳秋,徐进,周勇,曾令兵.  病毒学报. 2009(05)
[4]C型凝集素受体CLRs与固有免疫[J]. 杨婷,唐丽,贺福初.  细胞与分子免疫学杂志. 2009(05)
[5]鱼类抗病毒非特异性免疫机制研究进展[J]. 王亚楠,孔晓瑜,史成银.  动物医学进展. 2008(05)
[6]核酸疫苗的研究进展及其在鱼类免疫中的应用[J]. 郝贵杰,沈锦玉,潘晓义.  大连水产学院学报. 2007(02)
[7]天然免疫系统的“分子模式识别作用”及其免疫生物学意义[J]. 陈政良,朱锡华.  免疫学杂志. 2000(03)
[8]草鱼出血病细胞培养弱毒疫苗的制备及其免疫效果[J]. 许淑英,李焕林,邓国成,姜兰.  水产学报. 1994(02)
[9]草鱼出血病细胞培养灭活疫苗的研究:疫苗的稳定性及佐剂和加强免疫对草鱼免疫应答的影响[J]. 杨先乐,左文功.  水生生物学报. 1993(01)

硕士论文
[1]草鱼RIG-I基因应对GCRV感染及病毒和细菌类似物刺激的功能研究[D]. 陈利军.西北农林科技大学 2013



本文编号：3540226