双齿围沙蚕MPⅡ两种ELISA检测方法的建立及应用

发布时间：2022-07-01 09:34

　　本研究通过已构建的双齿围沙蚕（Perinereis aibuhitensis）金属结合蛋白MPII重组表达菌的活化、扩大培养、破碎、离心等，获得原核表达产物目标蛋白MPII，采用His-Bind蛋白纯化试剂盒对目的蛋白进行了纯化，利用考马斯亮蓝G-250测定目的蛋白浓度；采用纯化的重组MPII蛋白免疫家兔，获得高免血清（一抗），并将纯化所得蛋白用碳酸盐包被液（pH9.6）按200、400、800、1600、3200、6400倍稀释，将硝酸纤维素膜（NC膜）制成6×8棋盘，包被抗原每孔滴加量2μL，待NC膜干燥后用约10mL质量分数为3%的小牛血清白蛋白（BSA）37℃培养箱中封闭45min，一抗用PBS按200、400、800、1600、3200、6400、12800倍稀释，PBS代替一抗作为阴性对照，进行Dot-ELISA检测；对间接ELISA检测反应条件进行优化；采用所建立的方法对正常双齿围沙蚕头部、体壁组织、消化道和疣足进行了分部位的间接ELISA检测，确定双齿围沙蚕MPII靶组织；采用不同浓度Cd（40、80、120mg/L）、Pb（10、15、20mg/L）、Zn（30、60... 

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

技术路线图

小牛血清白蛋白标准曲线

Dot-ELISA灵敏度检测结果


本文编号：3653994