牡蛎多糖产品研发及泥鳅凝集素的研究

发布时间：2020-08-05 11:54

【摘要】：太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)是一种海洋无脊椎动物,是我国重要的经济养殖贝类之一,其所含有的牡蛎多糖具有丰富生物活性。本文将牡蛎多糖(C.gigas polysaccharides,CGP)用于研发牡蛎多糖葡萄酒及牡蛎多糖酵素饮料,并研究了二者的生物活性,为牡蛎多糖的应用提供基础数据。泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)属脊索动物门鳅科泥鳅属,其体表粘液中含有具有抗菌免疫功能的凝集素。本文提取泥鳅凝集素(M.anguillicaudatus lectin,MAL),研究其理化性质及生物活性,为泥鳅凝集素的深入研究提供基础数据。所取得的主要结果如下:1.将CGP与酿酒酵母共同发酵,发现CGP具有促进酵母增殖的作用。通过紫外-可见光谱及傅里叶红外光谱(FTIS)分析,发现CGP与红酒多酚具有相互作用,其强度随着添加红酒多酚浓度的增大而上升,红酒多酚的加入通过改变C-N的伸缩振动而改变了CGP中蛋白质的构象。将CGP加入到赤霞珠葡萄中,与葡萄酒酵母共同发酵、陈酿,获得牡蛎多糖葡萄酒。通过气质联用仪分析了牡蛎多糖葡萄酒的香气成分,发现酒中产生了含量较高的硅烷二醇、2-辛烯-1-醇、1-脱氧-d-甘露醇并产生了更复杂的酯类香气。2.将牡蛎多糖与多种果蔬共同发酵,制备出牡蛎多糖酵素饮料。抗氧化实验表明,牡蛎多糖酵素饮料较无牡蛎多糖的酵素饮料有更好的抗氧化活性。牡蛎多糖酵素饮料对四氧嘧啶致糖尿病ICR小鼠降血糖实验表明,其能够降低糖尿病小鼠的血糖值,且与高血糖组相比,牡蛎多糖酵素饮料组(200、400 mg/kg/day)的小鼠体内TG含量显著下降(P0.05),TC及GSP含量极显著下降(P0.01)。此外,牡蛎多糖酵素饮料组(400、800 mg/kg/day)小鼠的尿肌酐和尿素氮含量下降极显著(P0.01)。3.泥鳅皮经匀浆、硫酸铵分级沉淀、DEAE-52和TSK G4000_(PWXL)凝胶色谱,分离纯化出具有半乳糖特异性的凝集素MAL。同时,其血凝活性被N-乙酰-D-半乳糖胺、猪胃黏蛋白和牛甲状腺球蛋白抑制。SDS-PAGE表明,MAL相对分子质量为60 kDa。不同理化条件影响MAL的血凝活性,温度对MAL血凝活性影响明显。MAL长时间置于高温条件下,其血凝活性显著降低直至失去血凝活性。MAL的最适pH值为7-8。氨基酸组成研究分析表明,MAL含有11.48%的丙氨酸,11.20%的天冬氨酸,10.33%的赖氨酸和9.09%的甘氨酸。抗氧化结果表明,MAL有清除DPPH·、ABTS~+·和·OH的作用。
【学位授予单位】：大连海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：TS218
【图文】：

图 2- 1 添加不同浓度 CGP 发酵液中酵母生长情况 Yeast growth in fermentation broth with different concentrations of测定添加不同浓度 CGP 发酵液的 pH 值，所得的 pH 变化如图加 CGP 的发酵液 pH 值下降快于未加 CGP 发酵液的 pH，添的 pH 值无明显差距。发酵 24 h 后，各锥形瓶中发酵液的 pH8 降至 pH 3.2。3.03.54.04.55.00 6 12 18 24HpTime（h）

多糖和多酚可以通过相互作用而释放出香气，改善红酒风味及改善口感。2.2.3 牡蛎多糖葡萄酒香气成分测定采用气质联用仪测定牡蛎多糖葡萄酒与未添加 CGP 葡萄酒的香气成分，所获得的牡蛎多糖葡萄酒及未添加 CGP 葡萄酒香气成分的质谱图见图 2- 7a 及 2- 7b，检测出二者的香气成分如表 2- 1 所示。从表 2-1 中可以看出，牡蛎多糖葡萄酒较未添加 CGP 葡萄酒产生了较高含量的硅烷二醇、2-辛烯-1-醇、1-脱氧-d-甘露醇及更复杂的酯类香气。同时，CGP 增强了酿酒酵母合成对-甲基异丙基苯-7-醇、辛酸乙酯、十四酸乙酯及 2-乙基-己酸乙酯的能力。多糖的添加为葡萄酒增加了更多的香气成分，使消费者在获得更多营养成分的同时享受到风味更广品质更高的葡萄酒。酿酒过程中人为添加多糖多见于啤酒的报道，而鲜少见于葡萄酒制备，如添加茶多糖的啤酒有更清亮透明的颜色，泡沫更洁白等[106]。通过对比添加 CGP 的葡萄酒与未添加 CGP葡萄酒的香气成分，更有助于直观看出二者之间的差距，为制备出风味物质含量更多，醇度更高，更受消费者喜爱的葡萄酒提供了基础数据。a) b)

注：1 标准蛋白质样品；2 纯化后的 MAL图 4- 3 MAL 的 SDS-PAGE 电泳图Fig.4- 3 The result of SDS-PAGE of MAL集素的凝集活性及糖结合特性中凝集素对血细胞的凝集效果不同，主要是由于各种凝集素小、与糖结合位点的数量、位置的差异。此外，还可能与差异等有关[114]。从泥鳅体表粘液中提取的 MAL 对绵羊血凝集效价为 32（图 4- 4）。经纯化后的 MAL 对绵羊血的血下降，这可能是提取过程中金属离子的损失造成的。63kDa48kDa

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本文编号：2781514