芹菜苷在体胃、肠吸收代谢机制及代谢物抗氧化能力研究

发布时间：2020-10-20 13:22

　　 芹菜是一种两年生的伞形花科草本植物,具有多种生物活性,如降血压、降血脂、抗氧化等多种作用。芹菜黄酮的研究多集中于生物活性方面,芹菜黄酮在体内消化吸收方面的研究较少。本文以芹菜苷为研究对象,利用大鼠胃、肠灌流模型研究芹菜苷在体吸收机制。基于非靶标代谢组学技术,采用液相色谱-质谱联用仪(LC/MS)研究芹菜苷在体内代谢变化。通过人脐静脉细胞(HUVECs)氧化损伤模型,考察芹菜苷代谢物对HUVECs的活性因子的变化,评价抗氧化能力。为芹菜的合理膳食、在体内吸收代谢作用及其代谢物功能活性的研究等提供理论依据。(1)建立大鼠胃、肠灌流模型,研究芹菜苷在体胃、肠消化吸收特征,加入蛋白抑制剂考察对芹菜苷吸收速率常数(Ka)、表观渗透系数(Papp)和累积吸收量的影响,探究芹菜苷在体肠吸收机制。结果表明芹菜苷在胃中吸收百分率在4-15%之间,芹菜苷在胃中的吸收性较差。芹菜苷在小肠中通过被动运输的方式进行吸收转运;30、90、150 μg/mL的芹菜苷在胃中消化吸收2 h后,其累积吸收量分别0.173、0.181、0.189 mg。肠道中消化吸收2 h后,其累积吸收量分别为0.998、1.089、1.509 mg。在小肠部位,各肠段吸收大小为:十二指肠空肠回肠结肠。说明十二指肠是芹菜苷在小肠吸收的最佳部位。芹菜苷是P-糖蛋白(P-gp)、寡肽转运蛋白(PEPT)的底物,P-糖蛋白(P-gp)外排作用与寡肽转运蛋白(PEPT)摄取作用是芹菜苷小肠吸收的主要吸收机制。(2)采用非靶标代谢组学技术研究芹菜苷在胃、肠消化吸收过程中的代谢变化。结果显示,在正模式下得出具有差异性的代谢产物总共22种,其中酚类化合物5种;负模式下得出具有差异性的代谢产物总共39种物质,其中酚类化合物14种。差异性物质种类主要包括黄酮类、脂肪酸类、氨基酸类、糖类、有机酸类等。芹菜苷吸收代谢过程中主要影响的通路有氨基酸代谢、脂肪酸代谢、糖代谢和有机酸代谢等。(3)通过人脐静脉细胞(HUVECs)氧化损伤模型,考察芹菜苷代谢物的抗氧化能力,结果表明,与模型损伤组相比,(30、90、150 ug/mL)的芹菜苷胃消化组的NO含量分别提高了 45.88%、67.76%、54.58%;芹菜苷肠消化组NO含量分别提高了 19.52%、55.29%、28.23%;芹菜苷胃消化组的MDA含量分别提高了 43.25%、49.06%、55.90%。芹菜苷肠消化组MDA含量分别提高了 33.77%、41.25%、48.25%。芹菜苷胃、肠代谢物能显著降低细胞内荧光强度,有效抑制细胞内氧化自由基的产生,具有明显的抗氧化能力,且抗氧化能力与浓度呈正相关性。
【学位单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：TS255.1
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩略词对照表
第一章 绪论
    1.1 芹菜简介
        1.1.1 芹菜
        1.1.2 芹菜黄酮类物质
    1.2 消化吸收模型的研究现状
        1.2.1 消化吸收模型
        1.2.2 胃、肠灌流模型研究现状
    1.3 氧化应激模型
        1.3.1 内皮细胞氧化应激模型
        1.3.2 人脐静脉细胞(HUVECs)氧化损伤模型的研究现状
    1.4 代谢组学
        1.4.1 代谢组学概述
        1.4.2 代谢组学的研究方法与分析技术
        1.4.3 代谢组学的研究现状
    1.5 研究的内容与意义
        1.5.1 研究目的与意义
        1.5.2 研究内容
第二章 芹菜苷在体胃-肠消化吸收机制
    2.1 实验材料、试剂与仪器
        2.1.1 材料与试剂
        2.1.2 实验仪器
        2.1.3 实验动物
    2.2 实验方法
        2.2.1 胃、肠灌流液中芹菜苷的方法学考察
        2.2.2 大鼠胃灌流模型的建立
        2.2.3 大鼠肠灌流模型的建立
        2.2.4 蛋白抑制剂对芹菜苷吸收的影响
        2.2.5 吸收特征指标测定与计算
    2.3 统计分析
    2.4 结果与讨论
        2.4.1 芹菜苷胃、肠灌流液专属性考察
        2.4.2 芹菜苷胃、肠灌流液稳定性考察
        2.4.3 芹菜苷胃、肠灌流液回收率考察
        2.4.4 大鼠胃、肠壁对芹菜苷的物理吸附性的考察
        2.4.5 芹菜苷在体胃消化吸收特征
        2.4.6 芹菜苷在体肠消化吸收特征
        2.4.7 芹菜苷含量与吸收量变化之间的相关性
        2.4.8 蛋白抑制剂对芹菜苷体肠吸收的影响
    2.5 本章小结
第三章 芹菜苷在体代谢机制研究
    3.1 实验材料、试剂与仪器
        3.1.1 实验材料与试剂
        3.1.2 实验仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 样本预处理
        3.2.2 LC/MS分析
    3.3 统计分析
    3.4 结果与讨论
        3.4.1 芹菜苷代谢物离子色谱图分析
        3.4.2 差异性代谢物分析
    3.5 本章小结
第四章 芹菜苷代谢物抗氧化能力研究
    4.1 实验材料、试剂与仪器
        4.1.1 实验材料与试剂
        4.1.2 实验仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 样品预处理
        4.2.2 MTT法检测细胞活性
        4.2.3 芹菜苷代谢物抗氧化能力
        4.2.4 流式细胞仪观察细胞凋亡
    4.3 统计分析
    4.4 结果与讨论
        4.4.1 细胞活性
        4.4.2 芹菜苷代谢物抗氧化应激能力
    4.5 本章小结
主要结论
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文

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本文编号：2848735