禽组织、禽蛋及猪肉中大观霉素和林可霉素残留气相色谱—串联质谱检测方法的研究

发布时间：2020-10-25 19:21

　　 本研究旨在建立禽组织(鸡肌肉、鸡肾脏、鸡肝脏、鸭肌肉、鹅肌肉)、禽蛋(鸡蛋、鸭蛋、鹅蛋、鸽蛋和鹌鹑蛋)及猪肌肉中大观霉素和林可霉素残留的气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)检测方法。本试验以京海黄鸡、高邮鸭、扬州鹅、家鸽、鹌鹑和三元(杜×长×大)杂交猪为试验素材,采用加速溶剂萃取(ASE)技术提取目标物,建立并优化禽组织、禽蛋和猪肌肉中大观霉素和林可霉素残留同时检测的GC-MS/MS检测方法。其主要研究结果如下:1.优化了大观霉素和林可霉素与双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(BSTFA)衍生反应的条件,即分别吸取1.0μg/mL大观霉素和林可霉素各100μL,40℃氮吹至干,加入200μL BSTFA和100L乙腈于10mL离心管中,密封,置于75℃烘箱中反应60 min,生成衍生产物大观霉素-硅醚和林可霉素-硅醚(spectinomycin-TMS and lincomycin-TMS)。2.建立并优化了利用加速溶剂萃取仪(ASE)同时提取禽组织、禽蛋及猪肌肉中大观霉素和林可霉素残留的方法。即在60℃C、1500 psi条件下,用正己烷脱脂,0.01M磷酸二氢钾缓冲液(pH 4.0)提取禽组织、禽蛋及猪肌肉中大观霉素和林可霉素残留,静态萃取5 min,萃取2次。该提取方法节省溶剂、样品基质影响小、萃取效率高、回收率高。3.建立并优化了禽组织、禽蛋及猪肌肉中同时检测大观霉素和林可霉素残留的气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)检测方法。采用EI模式,全扫描(SCAN)定性,Auto SRM结合外标法定量。结果显示:在空白鸡肌肉、鸭肌肉、鹅肌肉、猪肌肉中添加大观霉素在定量限(LOQ)～600.0 μg/kg浓度范围内,定量离子对的色谱峰面积与其浓度呈线性相关,且线性关系良好,决定系数(R2)≥0.9992;空白鸡肝脏、鸡肾脏、禽蛋(全蛋、蛋清、蛋黄)中添加大观霉素在LOQ～2000.0μg/kg浓度范围内,定量离子对的色谱峰面积与其浓度呈线性相关,且线性关系良好,决定系数(R2)≥0.9991。空白鸡肝脏中添加林可霉素在定量限(LOQ)～1000.0μg/kg浓度范围内,定量离子对的色谱峰面积与其浓度呈线性相关,且线性关系良好,决定系数(R2)为0.9994;在空白鸡肾脏中添加林可霉素在LOQ～3000.0μg/kg浓度范围内,定量离子对的色谱峰面积与其浓度呈线性相关,且线性关系良好,决定系数(R2)为0.9995;空白鸡肌肉、鸭肌肉、鹅肌肉、猪肌肉、禽蛋(全蛋、蛋清、蛋黄)中添加林可霉素在定量限(LOQ)～200.0 μg/kg浓度范围内,定量离子对的色谱峰面积与其浓度呈线性相关,且线性关系良好,决定系数(R2)≥0.9992。当大观霉素、林可霉素在空白样品中添加浓度分别为LOQ、0.5 MRL、1.0 MRL和2.0 MRL时,禽组织和猪肌肉中大观霉素和林可霉素的添加回收率分别为79.72%～94.23%、78.86%～93.64%;日内相对标准偏差(RSD)分别为2.29%～5.45%、2.24%～4.89%;日间 RSD 分别为 3.46%～7.76%、2.55%～6.17%;检测限(LOD)分别为 2.5～4.4μg/kg、3.1～6.0μg/kg(5/论3);定量限(LOQ)分别为5.7～8.7μg/kg、6.2～10.0μg/kg(S≥10)。禽蛋(全蛋、蛋清、蛋黄)中大观霉素和林可霉素的添加回收率分别为80.37%～95.72%、80.01%～95.12%;日内 RSD 分别为 2.03%～5.23%、1.93%～5.99%;日间 RSD 分别为 2.23%～6.67%、3.05%～6.71%;LOD 分别为 2.3～4.0μg/kg、2.5～4.3 μg/kg(S/N≥3);LOQ 在 5.6-8.0μg/kg、5.9～9.5μg/kg(S/N≥10)。方法验证参数均满足中国农业农村部、EU和美国FDA兽药残留检测的要求,定量准确、快速、灵敏度高。
【学位单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：O657.63;TS207.3
【部分图文】：

ｃ１８ｈ３４ｎ２〇６ｓ。该物质为白色结晶性粉末，无臭，味苦，可溶于水、甲醇，在乙醇??中略溶。耐热，性质稳定，ｐＫａ为７．６，?２０％的水溶液ｐＨ值为３．０？５．５。其结构如??图１－１所示。??Ｏ?Ｐ？ＨＩ?Ｉ?１?Ｃ?Ｈ??％＝?＾?Ｉ??ＨａＣ?ＭＯ—／—＾??图１－１林可霉素结构式??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｌｉｎｃｏｍｙｃｉｎ??１．２作用机理??林可霉素（ｌｉｎｃｏｍｙｃｉｎ）是由链霉菌产生的一种林可胺类碱性抗生素［２５］，该??药对革兰氏阳性细菌（如厌氧菌、链球菌、金黄色葡萄球菌）有效［２Ｗ７］，革兰氏??阴性细菌（粪链球菌、酵母菌、某些梭状芽胞杆菌等）均无效［２８］。作用机理是与??细菌的核蛋白体５０Ｓ亚基结合，抑制肽酰基转移酶，阻碍了细菌蛋白质的合成，??从而使其易被吞噬和杀灭［２９，３（）】。林可霉素对免疫系统有增强免疫调节的作用，可??增强多核型白细胞的吞噬和杀菌功能，改变细菌表面活性和抑制细菌毒素的产生。??口服或注射给药林可霉素临床不良反应可累及全身各个系统，常见为胃肠道反应??［１１］，另外有呼吸道感染［３１］、神经系统损害［３２］、过敏性休克［３３］、甚至死亡［３４］。??１．３药理作用及其耐药性??林可霉素一般起抑菌作用

子式为ＣＩ４Ｈ２４Ｎ２０７，分子量为３３２．１５。常用其盐酸盐，为白色或类白色结晶性粉??末。易溶于水、丙二醇、Ｎ，Ｎ－二甲基乙酰胺，乙醇中极微溶，对热不稳定，ｐＫａ??为７￣７．８，１０％水溶液的ｐＨ值为３．８￣５．５，其结构如图１－２所示。??ＣＨ，??ＨＮＣＨａ?Ｏ??图１－２大观霉素结构式??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｓｐｅｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ??

图２－１ＢＳＴＦＡ用量对衍生反应的影响（ｎ＝５）??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ＢＳＴＦＡ?ｕｓａｇｅ?ｏｎ?ｄｅｒｉｖａｔｉｏｎ?ｒｅａｃｔｉｏｎ?（ｎ＝５）??由图２－１可见，在一定范围内，随着ＢＳＴＦＡ添加量的增加，衍生产物峰面??积也随着增加，当ＢＳＴＦＡ的添加量为２００?ｐＬ，衍生产物峰面积最大。即２００?ｎＬ??为最佳用量。??２５００００００?１??２０００００００?－??＾?Ｘ??ｉ?ｉ?ｉ??＜?１５００００００?－?ｆ’??？?ｌｏｏｏｏｏｏｏ?－?￣－＊■大观霉素??奢?一＊ｒ－林可霉素??５００００００?－??０?Ｉ?Ｉ?Ｉ?ｉ?ｉ?ｉ??５０?１００?１５０?２００?２５０?３００??乙腈加入量（ｐＬ）??图２－２乙腈用量对衍生反应的影响（ｎ＝５）??Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ?ｕｓａｇｅ?ｏｎ?ｄｅｒｉｖａｔｉｏｎ?ｒｅａｃｔｉｏｎ?（ｎ＝５）??硅烷化衍生反应需要添加非质子化溶剂，如吡啶、乙腈、二甲亚砜、四氢呋??喃、Ｎ，Ｎ－二甲基甲酰
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本文编号：2855853