富硒黑茶多糖的提取分离纯化及性质研究

发布时间：2020-11-09 11:29

　　 硒多糖是一种兼具硒与多糖双重活性的有机硒化合物,因其生物利用度高、毒性低而成为新的研究热点,具有抗氧化、抗肿瘤、提高机体免疫等多种活性。本论文的研究对象-富硒茶多糖,是从富硒黑茶中提取分离得到的硒多糖,不仅具有多糖的生物活性,且具有良好的应用前景,但当前国内外对其研究报道比较少,尤其是关于富硒黑茶多糖的结构特征及活性上的研究。本论文以湖北富硒黑茶为原料,采用热水浸提-乙醇沉淀的方法提取富硒黑茶多糖,并利用DEAE-Sepharose FF分离纯化硒多糖,而后对硒多糖进行了理化组成分析,结构表征及体外活性的研究。主要研究结果如下:(1)通过对富硒黑茶原料的基本成分分析,富硒黑茶的硒含量符合国家对于富硒食品定义中硒含量的规定要求。富硒黑茶多糖提取单因素实验结果表明:提取温度为90℃最合适,提取时间为2h最佳,提取料液比为1:20最优。而后通过响应面设计软件对富硒黑茶多糖提取工艺进行优化设计,得到最佳提取温度为94.2℃,最佳提取时间为1.64 h,最佳提取料液比为1:20.56,理论得率为6.0%。通过响应面分析可知提取时间和提取料液比对多糖得率的影响为极显著(P0.01),提取温度对多糖得率的影响为显著P=0.0393(P0.05)。由于实际操作的限制,因而在验证性实验中最终设定提取温度为95℃,提取时间为2h,提取料液比为1:20。在这样的提取条件下多糖得率为6.00%左右,与理论得率误差在2%范围内波动,符合设计要求。提取后的富硒黑茶粗多糖经DEAE Sepharose Fast Flow分离,最后经UV在490nm下测定吸光度值。通过收集不同洗脱时间节点下的组分,得到6组洗脱组分峰。洗脱分离的各个组分酸性糖测定实验表明,洗脱的六个组分的糖醛酸含量均较高,是典型的酸性多糖。(2)通过对富硒黑茶多糖粗品和6种纯化组分进行紫外全波长扫描得出富硒黑茶多糖粗品和分离洗脱组分均在280nm处无明显吸收峰,说明富硒黑茶多糖均不含有芳香族氨基酸。而通过聚丙烯氨酰胺凝胶电泳可知富硒黑茶多糖粗品和6种纯化组分均不含游离的蛋白。红外光谱结果表明富硒黑茶多糖以及6种纯化组分都具有典型的多糖类吸收峰。凝胶反渗透色谱结果表明富硒黑茶多糖具有较高的分子量且含有酰胺键,可初步推断其为糖蛋白结合物。离子色谱结果表明富硒黑茶多糖纯化组分中单糖组成单糖含量最高为11种,最低为10种。由扫描电镜和原子力显微镜的结果可知,富硒黑茶多糖的纯化组分在表观结构、表面平整度方面均具有明显差异。XRD衍射分析可知富硒黑茶多糖粗品和纯化组分在晶体形成方面差异显著。而DSC分析结果表明富硒黑茶多糖纯化组分之间热特性变化均具有显著差异。(3)ABTS~+自由基清除实验表明,富硒黑茶多糖粗品及各纯化组分对ABTS~+自由基清除活性与对照组相比差异显著,但各组分之间无明显差异。超氧阴离子自由基清除实验表明,富硒黑茶多糖粗品及各纯化组分与对照组相比差异显著,但各组分之间无显著差异。α-葡萄糖苷酶抑制率实验结果表明富硒黑茶多糖粗品及各纯化组分均对α-葡萄糖苷酶有显著抑制活性并且和阳性对照阿卡波糖组相比差异不显著。通过人工胃液体外消化实验可知经提取纯化获得的富硒黑茶多糖不易被胃液消化。而经人工肠液的体外消化实验可知富硒黑茶多糖粗品及其组分亦不易被肠液消化。(4)通过对高得率、高平整度组分4进一步分离纯化,得到了均一组分,并对均一组分进行超氧阴离子自由基和ABTS~+自由基的清除率分析。结果表明自由基清除活性与均一组分浓度呈正相关,且浓度在1mg/ml时ABTS自由基清除率达到80%,超氧阴离子自由基能达到70%。
【学位单位】：上海师范大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：TS201.2
【部分图文】：

Pb 没有检出，Co、Ni、Cu、Cd 在富硒黑茶原料中都能多糖中没有检出，Cr 元素都能检出但是富硒黑茶粗多糖中十倍。Xie 和 Nie[98]等使用 ICP-MS 研究了茶叶粗多糖中 Zn元素，浓度分别为 25.72、2354、77.47、6.432 和 0.001mg/kg用 ICP-AES 研究了青钱柳多糖中 18 种矿质元素，结果表明e、Mn 和 P 的浓度范围 274.5±10.3 到 5980.0±102.7mg/kg，而b、Cu 和 As 浓度范围 0.9±0.1 到 37.1±4.2mg/kg，Ni、Cd、V硒黑茶多糖提取单因素实验结果取温度对富硒黑茶多糖得率的影响时间、提取料液比相同的条件下，考察不同的提取温度（50、90℃、100℃）对多糖得率的影响，其结果如图 2-1。由图 50℃-90℃区间呈现递增的趋势，在 90℃-100℃有下降的趋

图 2-2 提取时间对多糖得率的影响Fig 2-2 Effect of extraction time on polysaccharides yield提取料液比对多糖的得率的影响取温度、提取时间相同的条件下，考察不同的提取料液比:15、1:20）对多糖得率的影响，其结果如图 2-3。由图 2液比 1:5-1:15 呈现明显递增的趋势，在 1:15 以后呈现下降

图 2-2 提取时间对多糖得率的影响Fig 2-2 Effect of extraction time on polysaccharides yield3 提取料液比对多糖的得率的影响提取温度、提取时间相同的条件下，考察不同的提取料液比（11:15、1:20）对多糖得率的影响，其结果如图 2-3。由图 2-3 可料液比 1:5-1:15 呈现明显递增的趋势，在 1:15 以后呈现下降的趋
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本文编号：2876359