三斑海马活性肽的制备及体外保肝特性的研究
发布时间：2021-11-22 09:27
三斑海马隶属于海龙科,是一种集药用性、食用性和观赏性于一身的小型珍稀海洋硬骨鱼,广泛分布于东印度洋和太平洋西北部。三斑海马富含蛋白质和磷脂等多种有益于人体健康的生物活性成分,因而具有增强性功能、益肾、抗氧化和抗血栓等保健功效。目前,酒精性肝病等各种类型的肝病仍然是世界性的健康难题。动物和体外肝细胞实验表明,缓激肽、海洋胶原蛋白肽、鸡肉蛋白肽和玉米蛋白肽等生物活性肽均具有一定保肝效果。鉴于此,本研究以三斑海马（10～13 cm）为原料,采用碱性蛋白酶酶解、透析、连续色谱分离,从中分离得到一种活性肽;随后以L-O2人正常肝细胞乙醇损伤模型研究其体外保肝特性。主要结论如下:1.三斑海马活性肽的分离纯化及结构鉴定通过碱性蛋白酶酶解、透析、Sephadex G-25层析分离和RP-HPLC纯化,得到一种多肽。质谱仪鉴定该肽一级结构为Pro-Ala-Gly-Pro-Arg-Gly-Pro-Ala（PAGPRGPA,721.39 Da）;体外测定其ACE抑制活性,IC50值为7.90μM;圆二色谱仪分析表明,该肽由6.0%α螺旋,31.5%β折叠（26.6%反平行β折叠,4.9...
【文章来源】：海南大学海南省 211工程院校
【文章页数】：110 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
三斑海马及其分布
三斑海马活性肽的制备及体外保肝特性的研究141.5技术路线按图2所示方案进行实验。图2技术路线图Fig.2Schematicillustrationofexperimentaldesign
三斑海马活性肽的制备及体外保肝特性的研究30海洋复杂多样、极端的生态环境，造就了海洋生物多样性及其所含生物活性物质的新颖性、多样性和独特性。现有研究表明，海洋鱼类蛋白酶解物、膜分离物均较难分离（Alemánetal.,2011；Heetal.,2013）。三斑海马也不例外，三斑海马酶解液因其成分复杂和样品本身性质，也较难分离（徐克寒，2015）。因此，在现有实验条件下，采取透析除杂，以减小分离难度。同时，选用较长玻璃层析柱，提高分离效果。鉴于层析柱较长时反压也越大，洗脱流速也相应减小，影响分离效果。在预实验基础上，设定流速0.3mL/min，同时，选择超纯水为洗脱液，避免NaCl等盐溶液洗脱后除盐步骤的样品损失（徐克寒，2015）。在确定上样体积2mL、洗脱流速0.3mL/min、超纯水为洗脱液后，实验研究了不同上样浓度（25、50、100mg/mL）对层析分离效果的影响。如图3所示，上样浓度为25mg/mL和50mg/mL时，分离效果相似，但前者各峰吸光度值相对较小，表明多肽、游离氨基酸和蛋白质等物质含量较低（Lew，2004），不利于收集。而上样浓度为100mg/mL时分离效果相对较差。因此，最后选取上样浓度为50mg/mL。图3不同上样浓度对SephadexG-25层析分离效果的影响。（A）上样浓度为25mg/mL；（B）上样浓度为50mg/mL；（C）上样浓度为100mg/mLFig.3EffectofdifferentloadingconcentrationsonchromatographicseparationofSephadexG-25.(A)25mg/mL;(B)50mg/mL;(C)100mg/mL
【参考文献】：
期刊论文
[1]《中国药典》收载中药海马的基原与性状探讨[J]. 蒋超,单锋,袁媛,刘富艳,詹志来,金艳,赵玉洋,黄璐琦. 中国中药杂志. 2017(19)
[2]鱼类脱脂方法研究进展[J]. 吴燕燕,朱小静. 核农学报. 2016(06)
[3]三斑海马线粒体基因组核苷酸全序列结构与分析[J]. 张艳红,刘帅帅,王信,王昌命,林强. 动物学杂志. 2016(03)
[4]Traditional Chinese medicine for treatment of liver diseases: progress, challenges and opportunities[J]. Chang-qing Zhao,Yang Zhou,Jian Ping,Lie-ming Xu. Journal of Integrative Medicine. 2014(05)
[5]我国海马的研究进展[J]. 姜素芬,吉爱国,梁浩,宋淑亮,王伟莉. 中药材. 2007(07)
[6]鲨肝活性肽S-8300免疫调节作用的研究[J]. 黄凤杰,吴梧桐. 中国天然药物. 2005(02)
[7]鲨肝活性肽对对乙酰氨基酚致小鼠急性肝损伤的保护作用[J]. 吕正兵,李谦,叶波平,边杉,王颖,阮期平,吴梧桐. 药学学报. 2004(01)
[8]鲨肝活性肽S-8300对小鼠急性肝损伤的保护作用[J]. 黄凤杰,李谦,吕正兵,吴梧桐. 中国海洋药物. 2004(01)
[9]高半胱氨酸对血管内皮细胞的损伤作用及中药抗损伤的实验研究[J]. 张继东,张维东,崔红燕,孟红,刘德山,张冰. 山东医科大学学报. 2001(06)
[10]日本海马对雄性大鼠附性器官及垂体──性腺轴的影响[J]. 张洪,罗毅,罗顺德. 中国海洋药物. 2001(02)
硕士论文
[1]三斑海马酶解液ACE抑制及抗氧化活性的研究[D]. 徐克寒.海南大学 2015
本文编号：3511410
【文章来源】：海南大学海南省 211工程院校
【文章页数】：110 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
三斑海马及其分布
三斑海马活性肽的制备及体外保肝特性的研究141.5技术路线按图2所示方案进行实验。图2技术路线图Fig.2Schematicillustrationofexperimentaldesign
三斑海马活性肽的制备及体外保肝特性的研究30海洋复杂多样、极端的生态环境，造就了海洋生物多样性及其所含生物活性物质的新颖性、多样性和独特性。现有研究表明，海洋鱼类蛋白酶解物、膜分离物均较难分离（Alemánetal.,2011；Heetal.,2013）。三斑海马也不例外，三斑海马酶解液因其成分复杂和样品本身性质，也较难分离（徐克寒，2015）。因此，在现有实验条件下，采取透析除杂，以减小分离难度。同时，选用较长玻璃层析柱，提高分离效果。鉴于层析柱较长时反压也越大，洗脱流速也相应减小，影响分离效果。在预实验基础上，设定流速0.3mL/min，同时，选择超纯水为洗脱液，避免NaCl等盐溶液洗脱后除盐步骤的样品损失（徐克寒，2015）。在确定上样体积2mL、洗脱流速0.3mL/min、超纯水为洗脱液后，实验研究了不同上样浓度（25、50、100mg/mL）对层析分离效果的影响。如图3所示，上样浓度为25mg/mL和50mg/mL时，分离效果相似，但前者各峰吸光度值相对较小，表明多肽、游离氨基酸和蛋白质等物质含量较低（Lew，2004），不利于收集。而上样浓度为100mg/mL时分离效果相对较差。因此，最后选取上样浓度为50mg/mL。图3不同上样浓度对SephadexG-25层析分离效果的影响。（A）上样浓度为25mg/mL；（B）上样浓度为50mg/mL；（C）上样浓度为100mg/mLFig.3EffectofdifferentloadingconcentrationsonchromatographicseparationofSephadexG-25.(A)25mg/mL;(B)50mg/mL;(C)100mg/mL
【参考文献】：
期刊论文
[1]《中国药典》收载中药海马的基原与性状探讨[J]. 蒋超,单锋,袁媛,刘富艳,詹志来,金艳,赵玉洋,黄璐琦. 中国中药杂志. 2017(19)
[2]鱼类脱脂方法研究进展[J]. 吴燕燕,朱小静. 核农学报. 2016(06)
[3]三斑海马线粒体基因组核苷酸全序列结构与分析[J]. 张艳红,刘帅帅,王信,王昌命,林强. 动物学杂志. 2016(03)
[4]Traditional Chinese medicine for treatment of liver diseases: progress, challenges and opportunities[J]. Chang-qing Zhao,Yang Zhou,Jian Ping,Lie-ming Xu. Journal of Integrative Medicine. 2014(05)
[5]我国海马的研究进展[J]. 姜素芬,吉爱国,梁浩,宋淑亮,王伟莉. 中药材. 2007(07)
[6]鲨肝活性肽S-8300免疫调节作用的研究[J]. 黄凤杰,吴梧桐. 中国天然药物. 2005(02)
[7]鲨肝活性肽对对乙酰氨基酚致小鼠急性肝损伤的保护作用[J]. 吕正兵,李谦,叶波平,边杉,王颖,阮期平,吴梧桐. 药学学报. 2004(01)
[8]鲨肝活性肽S-8300对小鼠急性肝损伤的保护作用[J]. 黄凤杰,李谦,吕正兵,吴梧桐. 中国海洋药物. 2004(01)
[9]高半胱氨酸对血管内皮细胞的损伤作用及中药抗损伤的实验研究[J]. 张继东,张维东,崔红燕,孟红,刘德山,张冰. 山东医科大学学报. 2001(06)
[10]日本海马对雄性大鼠附性器官及垂体──性腺轴的影响[J]. 张洪,罗毅,罗顺德. 中国海洋药物. 2001(02)
硕士论文
[1]三斑海马酶解液ACE抑制及抗氧化活性的研究[D]. 徐克寒.海南大学 2015
本文编号：3511410
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