灵芝酸A对人宫颈癌HeLa细胞的抑制活性及其机理
发布时间：2021-11-26 12:48
灵芝作为国家药食同源的重要资源,且属于“十大皖药”之一,因其抗肿瘤和免疫调节作用而被用作健康促进剂。本论文以灵芝为材料,探究灵芝酸A诱导人宫颈癌Hela细胞的凋亡机理以及灵芝酸A对小鼠抗肿瘤作用。最后,利用转录组学技术,从m RNA水平明确灵芝酸A作用对宫颈癌Hela细胞的调控。研究结果明确了灵芝酸A的抗癌机制,为把灵芝开发为特殊医学食品建立了基础。灵芝酸A诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及其机理。以标准的灵芝酸A处理宫颈癌Hela细胞,灵芝酸A能显著抑制宫颈癌Hela细胞的增殖,24h的IC50为39.8μM。灵芝酸A阻滞细胞周期在G2/M期,诱导细胞凋亡。经过灵芝酸A处理后,可知与细胞周期相关基因的表达量发生改变,cdk1、chk2、cdc2和Cyclin B的表达量降低,cdc25、p53和p21的表达量上升。同时灵芝酸A调控死亡受体通路和线粒体等相关通路的基因表达引起Hela细胞的凋亡,灵芝酸A处理后上述通路中的Bax、Bak、Bim、Caspase-9、Caspase-3、TNF-R1、Caspase-8、p21、PUMA、cytc、p-Akt、PARP、Ap...
【文章来源】：合肥工业大学安徽省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
灵芝Fig1.1Ganodermalucidum
第2章灵芝酸A诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及其机理20鲜稀释ProteinaseK37℃消化5min后，用0.01MTBS洗涤。加入标记缓冲液后再洗涤，用封闭液封闭，生物素化抗地高辛抗体，SABC一次处理后,进行DAB显色和苏木素复染。脱水，透明，封片后显微镜观察。2.1.9统计与分析通过使用SPSS21.0软件进行统计分析。所有的数据都表示为平均值±标准偏差（SD）（n≥3）。单因素分析（ANOVA）是利用Origin（Origin6.0）软件分析数据显著性水平p<0.05。2.2结果与分析2.2.1灵芝酸A对Hela细胞活力的作用图2.1灵芝酸A对Hela细胞活力的作用Fig2.1EffectofGanodermaacidAonHeLacellviability通过不同浓度的灵芝酸A（0，10，20，30，40，50，60，70，80μM）处理Hela24h，结果表明灵芝酸A对Hela细胞活力抑制作用十分明显（图2.1）。并且灵芝酸A对细胞增殖的抑制作用呈浓度依赖性方式，不断增强。当处理Hela细胞24h时，20μM、40μM、60μM的灵芝酸A对Hela细胞的抑制率分别达到了21.44%、50.08%、75.52%。24h的半抑制浓度(IC50)为39.8μM。2.2.2灵芝酸A对Hela细胞形态的作用为了探究灵芝酸A对Hela增殖的作用，在倒置的光学显微镜下，通过不同浓度的灵芝酸A(0μM、20μM、40μM、60μM)处理细胞，观察细胞形态的改变(图2.2)。经过灵芝酸A作用24h后，Hela细胞数目显著减少，形态也发生了变化，可见多种的异常形态。在正常条件下，Hela细胞(空白对照组)呈现为贴附在培养皿底层的多边形，而经灵芝酸A处理后的细胞就出现不规则的多边形形状，细胞逐渐变圆变亮，排列十分松散，贴壁也变得松弛。
第2章灵芝酸A诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及其机理21图2.2灵芝酸A诱导Hela细胞形态变化Fig2.2MorphologicalchangesofHeLacellsinducedbyGanodermaacidA2.2.3灵芝酸A诱导Hela细胞周期停滞及机制用不同浓度的灵芝酸A(0μM、20μM、40μM、60μM)处理Hela细胞24h，用流式细胞仪检测细胞周期，细胞周期以及各个阶段的比例分布如图2.3。与对照组相比，随着灵芝酸A浓度的增加，细胞阻滞在G2/M期的比例也逐渐变大。正常Hela细胞(不经药物处理)在G2/M期的比例为22.7％，而20μM、40μM和60μM浓度的灵芝酸A处理细胞24h后，G2/M期的细胞所占比例分别为26.04％、30.72％、36.25%。实验结果表明灵芝酸A可以诱导Hela细胞周期阻滞在G2/M期。图2.3灵芝酸A诱导Hela细胞周期阻滞及不同细胞阶段的细胞百分比Fig2.3Cellpercentageindifferentcellcyclephases为了解灵芝酸A诱导细胞周期阻滞在G2/M阶段的具体分子机制，通过实时定量PCR技术检测与周期相关基因的表达变化（图2.4）。在真核细胞中，细胞分裂周期的进程是由细胞周期蛋白依赖性激酶的顺序激活所驱动的。Cdk1激酶的活
【参考文献】：
期刊论文
[1]细胞周期及信号通路与细胞衰老关系的研究进展[J]. 苑莉莉. 实用老年医学. 2018(12)
[2]灵芝酸A对人炎性乳腺癌细胞体外增殖和凋亡的影响[J]. 林晓萌,丁琪琼,陈鹊汀,张磊,郝鑫,李中. 吉林大学学报(医学版). 2018(01)
[3]灵芝酸研究进展[J]. 邢康康,刘艳,贺宗毅,陈仕江. 食用菌学报. 2017(03)
[4]灵芝酸A对人前列腺癌细胞DU-145细胞凋亡的影响[J]. 潘恩山,李煜罡. 广东医学. 2017(01)
[5]苯并（a）芘对HELF细胞S期细胞周期相关蛋白的作用[J]. 祁妍敏,姚碧云,于红燕,赵鹏,周宗灿. 毒理学杂志. 2016(06)
[6]灵芝三萜化合物的抗肿瘤靶点预测与活性验证[J]. 杜国华,王宏旭,闫征,刘莉莹,陈若芸. 中国中药杂志. 2017(03)
[7]灵芝酸A对人胶质瘤细胞U251细胞增殖、凋亡和侵袭的影响[J]. 刘海鹏,郑克彬,单小松. 中国比较医学杂志. 2016(03)
[8]赤灵芝抗肿瘤作用的研究现状[J]. 宋代玉,刘有旺,李雅林. 泰山医学院学报. 2015(11)
[9]细胞周期抑制剂治疗肿瘤的进展[J]. 付文锋,刘天礽. 实用临床医学. 2015(10)
[10]灵芝酸A对人骨肉瘤细胞增殖、凋亡和迁移的影响（英文）[J]. 邵建立,李志忠,焦根龙,孙国栋,周志刚. 南方医科大学学报. 2015(05)
博士论文
[1]茶病灵芝、树灵芝和无柄紫灵芝化学成分及生物活性研究[D]. 刘莉莹.北京协和医学院 2017
本文编号：3520178
【文章来源】：合肥工业大学安徽省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
灵芝Fig1.1Ganodermalucidum
第2章灵芝酸A诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及其机理20鲜稀释ProteinaseK37℃消化5min后，用0.01MTBS洗涤。加入标记缓冲液后再洗涤，用封闭液封闭，生物素化抗地高辛抗体，SABC一次处理后,进行DAB显色和苏木素复染。脱水，透明，封片后显微镜观察。2.1.9统计与分析通过使用SPSS21.0软件进行统计分析。所有的数据都表示为平均值±标准偏差（SD）（n≥3）。单因素分析（ANOVA）是利用Origin（Origin6.0）软件分析数据显著性水平p<0.05。2.2结果与分析2.2.1灵芝酸A对Hela细胞活力的作用图2.1灵芝酸A对Hela细胞活力的作用Fig2.1EffectofGanodermaacidAonHeLacellviability通过不同浓度的灵芝酸A（0，10，20，30，40，50，60，70，80μM）处理Hela24h，结果表明灵芝酸A对Hela细胞活力抑制作用十分明显（图2.1）。并且灵芝酸A对细胞增殖的抑制作用呈浓度依赖性方式，不断增强。当处理Hela细胞24h时，20μM、40μM、60μM的灵芝酸A对Hela细胞的抑制率分别达到了21.44%、50.08%、75.52%。24h的半抑制浓度(IC50)为39.8μM。2.2.2灵芝酸A对Hela细胞形态的作用为了探究灵芝酸A对Hela增殖的作用，在倒置的光学显微镜下，通过不同浓度的灵芝酸A(0μM、20μM、40μM、60μM)处理细胞，观察细胞形态的改变(图2.2)。经过灵芝酸A作用24h后，Hela细胞数目显著减少，形态也发生了变化，可见多种的异常形态。在正常条件下，Hela细胞(空白对照组)呈现为贴附在培养皿底层的多边形，而经灵芝酸A处理后的细胞就出现不规则的多边形形状，细胞逐渐变圆变亮，排列十分松散，贴壁也变得松弛。
第2章灵芝酸A诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及其机理21图2.2灵芝酸A诱导Hela细胞形态变化Fig2.2MorphologicalchangesofHeLacellsinducedbyGanodermaacidA2.2.3灵芝酸A诱导Hela细胞周期停滞及机制用不同浓度的灵芝酸A(0μM、20μM、40μM、60μM)处理Hela细胞24h，用流式细胞仪检测细胞周期，细胞周期以及各个阶段的比例分布如图2.3。与对照组相比，随着灵芝酸A浓度的增加，细胞阻滞在G2/M期的比例也逐渐变大。正常Hela细胞(不经药物处理)在G2/M期的比例为22.7％，而20μM、40μM和60μM浓度的灵芝酸A处理细胞24h后，G2/M期的细胞所占比例分别为26.04％、30.72％、36.25%。实验结果表明灵芝酸A可以诱导Hela细胞周期阻滞在G2/M期。图2.3灵芝酸A诱导Hela细胞周期阻滞及不同细胞阶段的细胞百分比Fig2.3Cellpercentageindifferentcellcyclephases为了解灵芝酸A诱导细胞周期阻滞在G2/M阶段的具体分子机制，通过实时定量PCR技术检测与周期相关基因的表达变化（图2.4）。在真核细胞中，细胞分裂周期的进程是由细胞周期蛋白依赖性激酶的顺序激活所驱动的。Cdk1激酶的活
【参考文献】：
期刊论文
[1]细胞周期及信号通路与细胞衰老关系的研究进展[J]. 苑莉莉. 实用老年医学. 2018(12)
[2]灵芝酸A对人炎性乳腺癌细胞体外增殖和凋亡的影响[J]. 林晓萌,丁琪琼,陈鹊汀,张磊,郝鑫,李中. 吉林大学学报(医学版). 2018(01)
[3]灵芝酸研究进展[J]. 邢康康,刘艳,贺宗毅,陈仕江. 食用菌学报. 2017(03)
[4]灵芝酸A对人前列腺癌细胞DU-145细胞凋亡的影响[J]. 潘恩山,李煜罡. 广东医学. 2017(01)
[5]苯并（a）芘对HELF细胞S期细胞周期相关蛋白的作用[J]. 祁妍敏,姚碧云,于红燕,赵鹏,周宗灿. 毒理学杂志. 2016(06)
[6]灵芝三萜化合物的抗肿瘤靶点预测与活性验证[J]. 杜国华,王宏旭,闫征,刘莉莹,陈若芸. 中国中药杂志. 2017(03)
[7]灵芝酸A对人胶质瘤细胞U251细胞增殖、凋亡和侵袭的影响[J]. 刘海鹏,郑克彬,单小松. 中国比较医学杂志. 2016(03)
[8]赤灵芝抗肿瘤作用的研究现状[J]. 宋代玉,刘有旺,李雅林. 泰山医学院学报. 2015(11)
[9]细胞周期抑制剂治疗肿瘤的进展[J]. 付文锋,刘天礽. 实用临床医学. 2015(10)
[10]灵芝酸A对人骨肉瘤细胞增殖、凋亡和迁移的影响（英文）[J]. 邵建立,李志忠,焦根龙,孙国栋,周志刚. 南方医科大学学报. 2015(05)
博士论文
[1]茶病灵芝、树灵芝和无柄紫灵芝化学成分及生物活性研究[D]. 刘莉莹.北京协和医学院 2017
本文编号：3520178
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/qgylw/3520178.html
