不同加工处理方式对中华绒螯蟹主要过敏原的影响
发布时间：2021-12-24 01:05
食物过敏作为一类食源性疾病在全球引起了广泛关注,甲壳类水产品是联合国粮农组织公布的八大类过敏食物之一。中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）又名河蟹,是我国重要的水产养殖品种之一,因其滋鲜味美,营养品质高,广受消费者的喜爱。近年来,随着河蟹产量和消费量的增长,因食用河蟹引起的过敏案例也日益增多,影响着河蟹的食用安全性及人们的身体健康。国内外研究表明,原肌球蛋白（tropomyosin,TM）是河蟹的主要过敏原。目前国内外对于河蟹TM的研究多集中在提取纯化及免疫学方面。因此,研究能够降低河蟹致敏性的不同加工处理方式具有重要意义。本文以中华绒螯蟹为原料,首先通过等电点沉淀、硫酸铵盐析等方法从蟹肉中得到纯化TM,纯化的过敏蛋白经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS–PAGE）和免疫印迹（Western blotting）分析与鉴定。接着,采用不同加工方式（蒸煮、反压蒸煮、高温高压、微波、超高压、超声波、超声波结合蒸煮等）对蟹肉进行处理,参照美国药典中模拟胃、肠液消化实验方法,对处理后蟹肉的TM粗蛋白进行消化,通过凝胶电泳、免疫印迹和抑制性酶联免疫吸附测定（Inhibitio...
【文章来源】：合肥工业大学安徽省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
技术路线图
第三章结果与分析18第三章结果与分析3.1TM的过敏原性质TM的纯化结果见图3.1（箭头所示为TM）。由图可知，TM的分子量在38kDa左右（图3.1A），且能与相应的RabbitAnti–Tropomyosin1发生特异性免疫反应（图3.1B），这表明纯化实验所得蛋白确为TM。AB图3.1纯化河蟹TM的SDS–PAGE和westernblotting分析Fig3.1ThepureTMwasanalysisedbySDS–PAGEandwesternblottingM：蛋白分子量标准；A：纯化TM的SDS–PAGE；B：纯化TM的westernblotting3.1.1热加工处理对TM消化稳定性和致敏性的影响3.1.1.1TM粗蛋白的模拟胃液消化通过蒸煮、反压蒸煮和高温高压加工方式处理蟹肉，并运用模拟胃液消化技术消化其TM粗蛋白，消化结果见图3.2。观察图片可以发现，通过胃蛋白酶的消化，在38kDa处的TM原始条带都出现了一定的降解。整个实验组中，TM和其它蛋白均随着消化时间的增加而慢慢被降解。从图3.2A和3.2B可发现，未处理与蒸煮处理在消化反应进行1min后，在34kDa处TM产生较为明显的降解
第三章结果与分析20ABCDEF图3.2不同处理的TM粗蛋白模拟胃液消化电泳图Fig3.2SDS–PAGEofSGFdigestiononTMcrudeextractM：蛋白分子量标准；A：未处理；B：蒸煮20min处理；C：反压蒸煮加工处理方法1；D：反压蒸煮加工处理方法2；E：高温高压加工处理方法1；F：高温高压加工处理方法2为了更准确的了解TM在胃蛋白酶消化实验中的降解情况，采用灵敏度更高的westernblotting技术进行分析。图3.3为图3.2的westernblotting分析图谱，从凝胶电泳图和免疫印迹图上可以发现，TM的降解情况基本保持一致。未处理与蒸煮处理在胃蛋白酶消化至1min时，均可检测到34kDa处的降解条带，消化反应进行到60min时，二者的TM原始条带均完全降解，但其降解条带仍然存在。从图3.3C、D、E、F中可以看到，经反压蒸煮与高温高压处理的蟹肉TM
【参考文献】：
期刊论文
[1]蟹类主要过敏原及其消减技术研究进展[J]. 林薇,许素玲,周琼艳,朱小霞,李玲芝. 中国食品卫生杂志. 2019(03)
[2]食物过敏原检测技术研究进展[J]. 王雅清,倪皓洁,李华韬,潘童,杨仁迪,傅玲琳,王彦波. 食品工业科技. 2019(13)
[3]60Co-γ辐照对猪血清白蛋白免疫原性及构象的影响[J]. 王玮,朱旭东,梁丽姣,舒蕊华,范巧君. 南京农业大学学报. 2018(03)
[4]水产品过敏原消减技术研究进展[J]. 费丹霞,徐赞美,肖宇,赵勇娟. 食品安全质量检测学报. 2018(08)
[5]水产品中主要过敏原的研究与展望[J]. 李风铃,李沂光,孙天乐,江艳华,姚琳,张亚南,翟毓秀. 中国渔业质量与标准. 2018(01)
[6]热加工对乳清中主要过敏原潜在致敏性的影响[J]. 费爽雯,白浩,李欣,曾弘华,陈红兵,李守明. 食品安全质量检测学报. 2017(04)
[7]温压结合的超高压技术对虾原肌球蛋白抗原性与结构的影响[J]. 韩建勋,陈颖,吴亚君,黄文胜,葛毅强. 光谱学与光谱分析. 2017(02)
[8]超高压结合酶法消减南美白对虾虾仁的致敏性[J]. 贾莹,胡志和. 食品科学. 2016(24)
[9]还原协同加热处理对花生过敏原Ara h2结构及抗原性的影响[J]. 李坤,连君,朱瑾,曾辛,陈红兵,吴志华. 食品科学. 2017(11)
[10]城市0～24月龄婴幼儿过敏性疾病症状流行病学调查[J]. 王硕,蒋竞雄,王燕,王姿欢,王婷,王惠珊. 中国儿童保健杂志. 2016(02)
博士论文
[1]虾（Penaeus Vannamei）过敏原免疫活性的研究[D]. 李振兴.中国海洋大学 2006
硕士论文
[1]中国对虾（Penaeus chinensis）原肌球蛋白抗原表位和关键氨基酸的筛选及糖基化对其过敏原性的影响[D]. 王金宝.浙江工商大学 2018
[2]章鱼过敏原的研究[D]. 沈海旺.集美大学 2012
[3]拟穴青蟹过敏原的性质研究[D]. 余惠琳.集美大学 2011
本文编号：3549530
【文章来源】：合肥工业大学安徽省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
技术路线图
第三章结果与分析18第三章结果与分析3.1TM的过敏原性质TM的纯化结果见图3.1（箭头所示为TM）。由图可知，TM的分子量在38kDa左右（图3.1A），且能与相应的RabbitAnti–Tropomyosin1发生特异性免疫反应（图3.1B），这表明纯化实验所得蛋白确为TM。AB图3.1纯化河蟹TM的SDS–PAGE和westernblotting分析Fig3.1ThepureTMwasanalysisedbySDS–PAGEandwesternblottingM：蛋白分子量标准；A：纯化TM的SDS–PAGE；B：纯化TM的westernblotting3.1.1热加工处理对TM消化稳定性和致敏性的影响3.1.1.1TM粗蛋白的模拟胃液消化通过蒸煮、反压蒸煮和高温高压加工方式处理蟹肉，并运用模拟胃液消化技术消化其TM粗蛋白，消化结果见图3.2。观察图片可以发现，通过胃蛋白酶的消化，在38kDa处的TM原始条带都出现了一定的降解。整个实验组中，TM和其它蛋白均随着消化时间的增加而慢慢被降解。从图3.2A和3.2B可发现，未处理与蒸煮处理在消化反应进行1min后，在34kDa处TM产生较为明显的降解
第三章结果与分析20ABCDEF图3.2不同处理的TM粗蛋白模拟胃液消化电泳图Fig3.2SDS–PAGEofSGFdigestiononTMcrudeextractM：蛋白分子量标准；A：未处理；B：蒸煮20min处理；C：反压蒸煮加工处理方法1；D：反压蒸煮加工处理方法2；E：高温高压加工处理方法1；F：高温高压加工处理方法2为了更准确的了解TM在胃蛋白酶消化实验中的降解情况，采用灵敏度更高的westernblotting技术进行分析。图3.3为图3.2的westernblotting分析图谱，从凝胶电泳图和免疫印迹图上可以发现，TM的降解情况基本保持一致。未处理与蒸煮处理在胃蛋白酶消化至1min时，均可检测到34kDa处的降解条带，消化反应进行到60min时，二者的TM原始条带均完全降解，但其降解条带仍然存在。从图3.3C、D、E、F中可以看到，经反压蒸煮与高温高压处理的蟹肉TM
【参考文献】：
期刊论文
[1]蟹类主要过敏原及其消减技术研究进展[J]. 林薇,许素玲,周琼艳,朱小霞,李玲芝. 中国食品卫生杂志. 2019(03)
[2]食物过敏原检测技术研究进展[J]. 王雅清,倪皓洁,李华韬,潘童,杨仁迪,傅玲琳,王彦波. 食品工业科技. 2019(13)
[3]60Co-γ辐照对猪血清白蛋白免疫原性及构象的影响[J]. 王玮,朱旭东,梁丽姣,舒蕊华,范巧君. 南京农业大学学报. 2018(03)
[4]水产品过敏原消减技术研究进展[J]. 费丹霞,徐赞美,肖宇,赵勇娟. 食品安全质量检测学报. 2018(08)
[5]水产品中主要过敏原的研究与展望[J]. 李风铃,李沂光,孙天乐,江艳华,姚琳,张亚南,翟毓秀. 中国渔业质量与标准. 2018(01)
[6]热加工对乳清中主要过敏原潜在致敏性的影响[J]. 费爽雯,白浩,李欣,曾弘华,陈红兵,李守明. 食品安全质量检测学报. 2017(04)
[7]温压结合的超高压技术对虾原肌球蛋白抗原性与结构的影响[J]. 韩建勋,陈颖,吴亚君,黄文胜,葛毅强. 光谱学与光谱分析. 2017(02)
[8]超高压结合酶法消减南美白对虾虾仁的致敏性[J]. 贾莹,胡志和. 食品科学. 2016(24)
[9]还原协同加热处理对花生过敏原Ara h2结构及抗原性的影响[J]. 李坤,连君,朱瑾,曾辛,陈红兵,吴志华. 食品科学. 2017(11)
[10]城市0～24月龄婴幼儿过敏性疾病症状流行病学调查[J]. 王硕,蒋竞雄,王燕,王姿欢,王婷,王惠珊. 中国儿童保健杂志. 2016(02)
博士论文
[1]虾（Penaeus Vannamei）过敏原免疫活性的研究[D]. 李振兴.中国海洋大学 2006
硕士论文
[1]中国对虾（Penaeus chinensis）原肌球蛋白抗原表位和关键氨基酸的筛选及糖基化对其过敏原性的影响[D]. 王金宝.浙江工商大学 2018
[2]章鱼过敏原的研究[D]. 沈海旺.集美大学 2012
[3]拟穴青蟹过敏原的性质研究[D]. 余惠琳.集美大学 2011
本文编号：3549530
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