人乳寡糖的分离制备及其在婴儿配方粉中的含量分析研究

发布时间：2022-01-05 01:46

　　人乳一直被认为是婴儿最佳的食物来源,也是婴儿配方粉的黄金标准。其中,人乳寡糖（Human milk oligosaccharides,HMOs）是仅次于乳糖和脂肪的第三大固体组分,在促进婴儿肠道菌群生长、完善免疫系统功能和抵抗病原体侵染过程中发挥着不可替代的作用。然而,HMOs结构复杂,异构体众多且含量差异大,这些都对人乳结构与功能关系的研究造成了巨大的困难。因此,开发人乳寡糖合适的分离、纯化和结构表征方法尤为重要。婴儿配方粉一般以成熟的牛乳为原料,缺少人乳中普遍存在的绝大部分HMOs,只含有极低含量的唾液酸化寡糖,如3′-唾液酸乳糖（3′-Sialyllactose,3′-SL）和6′-唾液酸乳糖（6′-Sialyllactose,6′-SL）。随着HMOs生物合成技术的发展,为了更好的模拟人乳以满足婴儿成长发育中的需要,在美国和欧盟2′-岩藻糖乳糖（2′-Fucosyllactose,2′-FL）和乳-N-新四糖（Lacto-N-neotetraose,LNn T）已获批添加到婴儿配方粉中。因此,需要开发合适的方法来对婴儿配方粉中的HMOs进行准确的定性、定量分析。本文首先采用多维... 

【文章来源】：大连医科大学辽宁省

【文章页数】：89 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

人乳寡糖的一维制备谱图

大连医科大学硕士学位论文9图1-1人乳寡糖的一维制备谱图我们选取一款具有亲水相互作用和阳离子交换作用的两性离子混合模式材料ClickTE-GSH作为一维制备色谱的材料。ζ电势显示，当pH>2时，ClickTE-GSH表面带负电荷，可以使唾液酸化寡糖与中性寡糖分离[17]。在乙醇-水体系下，酸性寡糖和ClickTE-GSH表面均带负电荷，由于静电排斥作用，酸性寡糖在死时间附近被排出，而乳糖和中性寡糖由于亲水属性被很好地保留，从而达到将酸性寡糖和中性寡糖分离的目的。一维制备谱图如图1-1所示，共得到了5个馏分，包括酸性寡糖馏分Fr0-6，乳糖馏分Fr6-18和中性寡糖馏分Fr18-33、Fr33-42和Fr42-55。分别对8个馏分进行浓缩处理，然后冻干处理后得到固体。按照2.2中的“一维制备所得酸性寡糖馏分的分析条件”和“一维制备所得中性寡糖馏分的分析条件”对各馏分进行HPLC分析，结果如图1-2和图1-3所示。从液相色谱图看，Fr0-6中含有系列酸性寡糖。同时，通过乳糖的保留时间及ESI-MS测定分子量，可以初步推断中性寡糖各个馏分所含寡糖的聚合度，均已标示在图1-3中。酸性寡糖的馏分分析：图1-2一维制备所得酸性寡糖馏分分析色谱图

大连医科大学硕士学位论文10中性寡糖的馏分分析：图1-3一维制备所得中性寡糖各馏分分析色谱图2.酸性人乳寡糖的分离制备将一维制备得到的酸性寡糖馏分（Fr0-6）浓缩后用于第二维的XAmide色谱柱分离纯化。XAmide是本人所在课题组自主合成的一种新型酰胺固定相，具有很好的亲水作用和弱阴离子交换作用，能够对酸性人乳寡糖等极性化合物进行很好的保留及分离。通过对分离条件进行优化，最后得到如图1-4所示的二维制备结果。


本文编号：3569483