基于介孔二氧化硅的正电荷纳米金免疫分析法用于检测阿维菌素

发布时间：2022-07-15 12:19

　　随着人们的生活不断的提升,人们对于的生活的质量的要求也不断提高,特别对于的食品安全的要求尤其在意。阿维菌素作为一个农用兽用药,是目前为止使用的最广泛的农兽药之一,在食品中存在残留的可能性。因而建立一种快速有效检测阿维菌素的方法密切关注。本实验是利用修饰阿维菌素使之偶联蛋白质去免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体,在获得多克隆抗体的基础上,结合介孔二氧化硅包裹的正电荷纳米金建立了对样品中阿维菌素的残留的检测。首先采用化学合成方法修饰阿维菌素分子使之更容易偶联蛋白,接着采用碳二亚胺法将其与大分子蛋白牛血清蛋白和卵清蛋白偶联作为免疫抗原和包被抗原。经红外光谱验证阿维菌素修饰物合成,经过紫外吸收和SDS-PAGE鉴定阿维菌素的免疫抗原和包被抗原的合成。接着用免疫抗原去免疫新西兰大白兔的得到多克隆抗体。通过化学合成合成正电荷纳米材料,同时由于纳米金带着正电荷的原因容易聚集沉淀,所以在这个基础上本人添加介孔二氧化硅作为载体,能够有效的使纳米材料更好地分离和活性物质更好地暴露。通过扫描电镜,透射电镜,元素映射,N₂吸附-脱附,X射线衍射,能量色散X射线和Zeta电位仪等方法验证纳米材... 

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
    1.1 前言
    1.2 农兽药残留
        1.2.1 农药残留及其危害
        1.2.2 兽药残留及其危害
    1.3 关于阿维菌素和其类似物
        1.3.1 阿维菌素简介
        1.3.2 阿维菌素及其类似物的物化性质
        1.3.3 作用机理
    1.4 检测方法
        1.4.1 仪器方法
        1.4.2 免疫分析方法
    1.5 纳米材料的发展
    1.6 本课题研究意义
第二章 阿维菌素抗原的制备
    2.1 引言
    2.2 实验试剂与仪器
        2.2.1 实验耗材
        2.2.2 实验仪器
        2.2.3 常用的缓冲液的配制
    2.3 实验步骤
        2.3.1 阿维菌素半抗原修饰
        2.3.2 阿维菌素修饰物的活化
        2.3.3 阿维菌素抗原的制备
    2.4 结果与讨论
        2.4.1 红外光谱鉴定结果
        2.4.2 阿维菌素合成抗原的表征
第三章 阿维菌素抗体的制备和测定
    3.1 引言
    3.2 实验试剂与仪器
        3.2.1 实验动物
        3.2.2 实验耗材
        3.2.3 常用的缓冲液的配制
        3.2.4 实验仪器
    3.3 实验步骤
        3.3.1 动物免疫
        3.3.2 抗体效价的测定
        3.3.3 抗原抗体的最佳浓度选择
        3.3.4 实验条件的优化
        3.3.5 样品制备
        3.3.6 竞争ELISA的建立和标准曲线的建立
        3.3.7 加标回收实验和特异性实验
        3.3.8 液相色谱条件
    3.4 结果与讨论
        3.4.1 免疫血清效价的测定
        3.4.2 实验条件的优化
        3.4.3 标准曲线的建立
        3.4.4 高效液相测量样品
第四章 纳米材料的制备和免疫方法的建立
    4.1 引言
    4.2 实验试剂与仪器
        4.2.1 实验耗材
        4.2.2 实验仪器
        4.2.3 常用缓冲溶液的配置
    4.3 实验方法
        4.3.1 正电荷纳米金的制备
        4.3.2 介孔二氧化硅包裹的正电荷纳米金的制备
        4.3.3 纳米材料偶联抗体
        4.3.4 基于纳米材料的酶联免疫方法的建立
        4.3.5 实验条件的优化
        4.3.6 标准曲线的建立
        4.3.7 加标回收实验和特异性实验
        4.3.8 方法准确性验证
    4.4 结果与讨论
        4.4.1 纳米材料的表征
        4.4.2 方法可行性的研究
        4.4.3 实验条件的优化
        4.4.4 方法学的建立和验证
结论与展望
    结论
    展望
参考文献
攻读硕士期间发表论文和申请专利
致谢



本文编号：3662036