基于WNT通路筛选具有胃黏膜修复和黑色素瘤抑制活性的植物多酚

发布时间：2022-10-08 18:01

　　异常的WNT信号传导与胃溃疡和黑色素瘤等多种疾病密切相关,因此寻找WNT通路调节剂则成为治疗WNT信号相关疾病的重要手段。植物多酚具有抗炎、抗氧化、抑菌、抗肿瘤和增强免疫力等多种生理活性,多酚类物质已经成为开发WNT信号调节小分子化合物的研究热点。本论文从26种植物中筛选出具有良好WNT信号抑制活性的枳实和桂枝两种原料。其中,枳实是国家食品药品监督管理总局批准使用的保健食品原料,桂枝则为日常饮食中常用的香料,枳实和桂枝中都含有丰富的多酚类物质,可作为保健食品原料进行研究。利用体积分数为75%乙醇从高良姜、茯苓、白扁豆、黄芪、吴茱萸、豆蔻、桂枝、郁金、白芷、枳实、白术、佛手、姜半夏、石斛、广藿香、甘草、人参、当归、麦冬、木香、柴胡、砂仁、陈皮、党参、白芍、干姜26种植物原料中提取出多酚粗提物,并通过Folin–Ciocalteu测定其多酚含量。HEK293-TOPflash双荧光素酶报告基因细胞模型可表征WNT信号处于激活或抑制状态。首先通过MTT法,测定不同植物多酚提取物对于HEK293-TOPflash细胞的最大无毒性作用浓度。HEK293-TOPflash细胞中添加WNT3A条件培... 

【文章页数】：132 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
    1.1 WNT信号研究进展
        1.1.1 WNT信号简介
        1.1.2 WNT信号研究主要方法
    1.2 WNT信号通路与人类健康的理论研究
        1.2.1 WNT信号通路与胃黏膜损伤、胃癌
        1.2.2 WNT信号通路与结直肠癌
        1.2.3 WNT信号通路与黑色素瘤
        1.2.4 WNT信号通路与乳腺癌
        1.2.5 WNT信号通路与骨质疏松
        1.2.6 WNT信号通路与自身免疫病
    1.3 WNT信号通路药物的研究进展
    1.4 植物多酚调节WNT的研究进展
        1.4.1 植物多酚靶向WNT信号的上游蛋白
        1.4.2 植物多酚靶向WNT信号中β-catenin降解复合体
        1.4.3 植物多酚靶向WNT信号中β-catenin/TCF
    1.5 本论文的主要研究内容及立题依据
第二章 筛选具有WNT信号抑制活性的植物多酚
    引言
    2.1 实验材料与试剂
    2.2 主要仪器与设备
    2.3 实验方法
        2.3.1 植物多酚的制备
        2.3.2 多酚含量的测定
        2.3.3 植物多酚对HEK293-TOPflash细胞活力的影响
            2.3.3.1 细胞培养
            2.3.3.2 细胞活力测定
        2.3.4 筛选抑制WNT信号的植物多酚提取物
            2.3.4.1 WNT3A条件培养基的制备
            2.3.4.2 HEK293-TOPflash细胞WNT信号值测定
        2.3.5 统计分析
    2.4 结果与讨论
        2.4.1 不同植物多酚提取物中多酚含量
        2.4.2 植物多酚提取物对HEK293-TOPflash细胞存活率的影响
        2.4.3 植物多酚提取物对WNT3A条件培养基激活WNT信号的影响
    2.5 本章小结
第三章 植物多酚提取物对WNT信号通路依赖的胃溃疡大鼠保护作用活性评价
    引言
    3.1 实验材料与试剂
    3.2 主要仪器与设备
    3.3 实验方法
        3.3.1 急性胃溃疡大鼠模型的建立
        3.3.2 宏观胃黏膜病变评估
        3.3.3 胃溃疡大鼠胃组织HE染色
        3.3.4 统计分析
    3.4 结果与讨论
        3.4.1 无水乙醇诱导大鼠胃溃疡损伤模型
        3.4.2 枳实、桂枝多酚提取物对大鼠胃溃疡指数的影响
        3.4.3 枳实、桂枝多酚提取物对大鼠胃溃疡组织的影响
    3.5 本章小结
第四章 植物多酚提取物对WNT信号通路依赖的黑色素瘤小鼠的防治作用
    引言
    4.1 实验材料与试剂
    4.2 主要仪器与设备
    4.3 实验方法
        4.3.1 黑色素肿瘤小鼠模型的建立及分组
        4.3.2 枳实、桂枝多酚提取物干预黑色素瘤小鼠
        4.3.3 黑色素瘤小鼠肿瘤体积及体重比测定
        4.3.4 黑色素瘤小鼠组织HE染色
        4.3.5 统计分析
    4.4 结果与讨论
        4.4.1 枳实、桂枝多酚提取物对小鼠黑色素瘤的影响
        4.4.2 枳实、桂枝多酚提取物对黑色素瘤小鼠肝肾组织的影响
    4.5 本章小结
第五章 枳实多酚分离纯化结构鉴定
    引言
    5.1 实验材料与试剂
    5.2 主要仪器与设备
    5.3 实验方法
        5.3.1 大孔树脂的筛选
        5.3.2 大孔树脂静态吸附实验
        5.3.3 RKO细胞存活率的测定
        5.3.4 纯化多酚组分WNT信号抑制活性测定
        5.3.5 多酚提取单因素优化实验
            5.3.5.1 乙醇浓度单因素实验
            5.3.5.2 料液比单因素实验
            5.3.5.3 提取时间单因素实验
            5.3.5.4 吸附等温线测定实验
        5.3.6 大孔树脂动态吸附解吸实验
        5.3.7 Ed U法检测WNT依赖肠癌细胞增殖率
        5.3.8 超高效液相色谱-质谱分析纯化组分多酚组成
        5.3.9 统计分析
    5.4 结果与讨论
        5.4.1 大孔树脂的筛选
        5.4.2 大孔树脂静态吸附解吸动力学曲线
        5.4.3 吸附等温线
        5.4.4 枳实和桂枝多酚对RKO细胞活力及WNT信号的影响
        5.4.5 大孔树脂动态吸附解吸
        5.4.6 多酚纯化组分对HCT116细胞增殖率的影响
        5.4.7 纯化枳实多酚组分的组成分析
    5.5 本章小结
结论与展望
    一、结论
    二、本论文的创新
    三、展望
参考文献
攻读硕士学位期间取得的研究成果
致谢
附件


【参考文献】：
期刊论文
[1]黑色素瘤缺乏因子2与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1在新生小鼠巨细胞病毒肝炎中的表达及意义[J]. 汪浩森,王军,邱文尧,苏飚.  中国妇幼保健. 2018(21)
[2]CIP2A过表达对胃黏膜上皮细胞增殖和凋亡的影响[J]. 张海云,常香荣.  中国病理生理杂志. 2016(10)
[3]复方蜥蜴散不同微粒组合剂对胃癌前病变模型大鼠Wnt信号通路下游C-Myc、Cyclin-D1蛋白表达的影响[J]. 叶景阳,朱西杰,王儒,李美丽,孔娟.  时珍国医国药. 2016(07)
[4]消痞愈萎汤联合胃复春片治疗慢性萎缩性胃炎伴胃黏膜肠上皮化生或异型增生64例临床观察[J]. 郑逢民,郑乐乐,郑中坚.  中医杂志. 2015(04)
[5]胃炎I号对胃癌前病变大鼠Wnt信号通路Wnt1,Wnt3a,CyclinD1表达的影响[J]. 曾进浩,潘华峰,刘友章,严艳,赵自明,任金玲,胡霞,李海文,赖秋华.  中药新药与临床药理. 2014(04)
[6]Wnt信号通路与消化道肿瘤关系的研究进展[J]. 杨升,卢辉山.  世界华人消化杂志. 2007(27)

博士论文
[1]从四君子汤促进脾虚胃溃疡愈合探索《内经》“脾主卫”机制[D]. 黄晓宇.北京中医药大学 2018
[2]荣胃理气方联合守宫对慢性萎缩性胃炎模型大鼠胃黏膜修复作用及Wnt信号通路的影响[D]. 何娟娟.湖北中医药大学 2017
[3]红皮云杉多酚分离鉴定及对S180荷瘤小鼠肿瘤抑制途径[D]. 周芳.东北林业大学 2016

硕士论文
[1]健脾益气方对β-catenin、GSK3β表达的影响及对CAG大鼠成模抑制作用的研究[D]. 刘宇旻.南京中医药大学 2017
[2]不同阶段慢性胃病胃粘膜组织中Hp感染与Wnt/β-catenin经典信号通路、SOX2、CyclinD1蛋白的相关性[D]. 赵文月.河北北方学院 2015
[3]苍耳亭提取分离及抗黑色素瘤的活性研究[D]. 吴育.南京中医药大学 2013



本文编号：3688172