基于环七肽的F-2毒素全抗原模拟物生物合成及其在免疫分析中的应用
发布时间：2022-10-20 15:12
玉米赤霉烯酮（F-2）广泛存在于小麦、谷物等粮食或饲料中,人类或动物食用受到真菌毒素污染的食物后,会引起潜在的健康危害,因此对食品中的F-2毒素进行有效地监控和快速检测是防止其危害人类健康的重要手段。F-2毒素的免疫分析检测方法的开发与应用主要基于竞争免疫分析模式,然而全抗原的合成与制备主要依赖于化学合成手段,在合成过程中使用的标准品及有毒试剂对操作人员的身体健康存在潜在的危害。越来越多的研究人员开始改进传统抗原的制备方法,寻找真菌毒素的替代物,并开发基于真菌毒素抗原模拟物的绿色免疫分析方法。利用噬菌体展示技术淘选真菌毒素模拟表位,并采用基因工程手段和原核表达体系真菌毒素生物合成全抗原模拟物,该方法可制备成本低廉、性能稳定、简单易得、绿色无毒的真菌毒素化学合成抗原替代物。本研究旨在利用噬菌体展示多肽技术,淘选F-2毒素的环七肽和线性十二肽噬菌体模拟表位,生物合成F-2毒素全抗原作为传统化学合成抗原的替代物,以期对比分析环七肽和线性十二肽的模拟表位在噬菌体和生物合成全抗原两种形式下免疫分析性能的差异,并探究生物合成全抗原模拟物在免疫学检测分析方法中的应用。主要研究内容及结果如下:1.以抗...
【文章页数】：97 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语
第1章 文献综述
1.1 玉米赤霉烯酮及其研究进展
1.1.1 玉米赤霉烯酮的结构及理化性质
1.1.2 F-2毒理性质
1.1.3 F-2的限量标准
1.1.4 F-2检测方法的研究进展
1.2 噬菌体展示环肽的研究进展及应用
1.2.1 噬菌体展示技术简介
1.2.2 噬菌体展示环肽技术
1.2.3 噬菌体展示环肽技术的应用
1.3 真菌毒素抗原模拟物的研究进展
1.3.1 噬菌体展示多肽
1.3.2 抗独特型抗体
1.3.3 体外重组蛋白表达系统研究进展
1.4 本课题研究的内容和意义
1.4.1 研究意义
1.4.2 研究内容
第2章 噬菌体展示F-2模拟表位肽的淘选及鉴定
2.1 实验材料、仪器和试剂
2.1.1 实验材料
2.1.2 实验仪器
2.1.3 实验试剂
2.2 实验方法
2.2.1 噬菌体展示F-2模拟表位肽的亲和淘选
2.2.2 噬菌体展示F-2模拟表位肽的活性鉴定
2.2.3 建立基于噬菌体展示F-2模拟表位肽的标准曲线
2.3 实验结果
2.3.1 噬菌体展示F-2模拟表位肽的亲和淘选
2.3.2 阳性克隆的鉴定
2.3.3 阳性克隆的特异性鉴定
2.3.4 噬菌体多肽阳性克隆氨基酸序列鉴定
2.3.5 建立基于噬菌体展示F-2模拟表位肽的标准曲线
2.4 讨论
2.4.1 影响淘选的因素
2.4.2 阳性克隆氨基酸序列分析
2.5 小结
第3章 基于噬菌体展示环七肽的F-2全抗原生物合成
3.1 实验材料、仪器和试剂
3.1.1 实验材料
3.1.2 实验仪器
3.1.3 实验试剂
3.2 实验方法
3.2.1 Peptides-MBP重组融合表达载体的构建
3.2.2 F-2全抗原Peptide-MBP的生物合成
3.2.3 F-2全抗原Peptide-MBP活性验证
3.3 实验结果
3.3.1 Peptide-MBP重组融合表达载体的构建
3.3.2 Peptides-MBP重组融合蛋白的原核表达
3.3.3 Peptides-MBP全抗原的免疫分析性能鉴定
3.4 讨论
3.5 小结
第4章 F-2多肽模拟表位-荧光素酶融合蛋白的原核表达
4.1 实验材料、仪器和试剂
4.1.1 实验材料
4.1.2 实验仪器
4.1.3 实验试剂
4.2 实验方法
4.2.1 pET-22b-Peptide-Nluc融合表达载体的构建
4.2.2 Peptide-Nluc融合蛋白的原核表达及纯化
4.2.3 Peptide-Nluc融合蛋白的活性分析
4.2.4 基于Peptide-Nluc直接竞争一步生物荧光酶联免疫分析法的建立
4.3 实验结果
4.3.1 F-2多肽-荧光素酶融合蛋白表达载体的构建
4.3.2 Peptide-Nluc融合蛋白的原核表达
4.3.3 Peptide-Nluc融合蛋白活性验证
4.4 小结
第5章生物合成抗原模拟物介导的三重荧光免疫层析技术的应用研究
5.1 实验材料、仪器和试剂
5.1.1 实验材料
5.1.2 实验仪器
5.2 实验方法
5.2.1 三重试纸条原理图
5.2.2 生物合成全抗原的原核表达及纯化
5.2.3 试纸条的组装
5.2.4 荧光探针的制备
5.2.5 荧光试纸条参数的优化
5.2.6 荧光试纸条检测性能的评估
5.3 实验结果
5.3.1 荧光探针的制备及表征
5.3.2 试纸条参数的优化
5.3.3 三重荧光试纸条半定量检测标准曲线
5.3.4 三重荧光试纸条特异性评估
5.3.5 三重荧光试纸条准确度及精密度分析
5.4 讨论
5.4.1 影响试纸条灵敏度的因素
5.4.2 生物合成抗原的成本分析
5.5 小结
第6章 结论与展望
6.1 结论
6.2 展望
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间的研究成果
【参考文献】：
期刊论文
[1]竞争性酶联免疫法快速检测高产奶牛精料补充料中玉米赤霉烯酮[J]. 李晓波,李慧娟,宋鸽,何娇,王克超,杨小剑,陈海燕,刘海旭. 食品安全质量检测学报. 2020(01)
[2]玉米赤霉烯酮检测方法研究进展[J]. 谭新柳,黄菲,缪文俊,明灯明,杨雅琼. 南京工业大学学报(自然科学版). 2020(01)
[3]超高效液相色谱-串联质谱法检测玉米油中的黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮[J]. 王丽英,任贝贝,路杨,刘印平,冯静,常凤启. 食品安全质量检测学报. 2019(12)
[4]重组蛋白微生物表达系统的研究进展[J]. 黄浩,王阳,堵国成,康振. 生物产业技术. 2019(03)
[5]玉米赤霉烯酮毒性的研究进展[J]. 杨美璐,吴峰洋,刘静慧,刘亚娟,陈宝江,谷子林,陈赛娟. 饲料研究. 2019(01)
[6]液相色谱法测定酱油中的玉米赤霉烯酮含量[J]. 乌吉木,高祥. 食品安全导刊. 2018(18)
[7]家禽饲料中玉米赤霉烯酮化学发光酶联免疫分析方法的建立[J]. 熊挺,蒋蔚,韩阳瑞,龙梦瑶,凌娇,王权,孙卫东. 畜牧与兽医. 2018(02)
[8]脱氧雪腐镰刀菌烯醇的环七肽模拟表位筛选[J]. 余鹃,贾彦琼,骆敏儿,王宏. 食品工业科技. 2017(24)
[9]剖析基因重组蛋白的表达系统与分离纯化的进展[J]. 孙世栋. 黑龙江科技信息. 2017(15)
[10]玉米赤霉烯酮对体外培养猪卵巢颗粒细胞的影响[J]. 周宏超,刘晓强,杨鸣琦,赵煜,李引乾. 中国兽医学报. 2017(02)
博士论文
[1]花状纳米金及抗独特型纳米抗体在真菌毒素免疫学检测中的应用研究[D]. 季艳伟.南昌大学 2017
[2]抗独特型纳米抗体的亲和力成熟及检测伏马菌素B1绿色免疫分析方法的研究[D]. 舒梅.南昌大学 2016
[3]基于模拟表位的玉米赤霉烯酮全抗原生物合成及其免疫学检测性能的研究[D]. 何庆华.南昌大学 2012
硕士论文
[1]玉米赤霉烯酮对小鼠肠道黏膜及IPEC-J2细胞损伤作用的研究[D]. 王新.吉林大学 2019
[2]特异性识别Cry1Ab多肽分子元件的构建及其在电化学免疫传感器的初步应用研究[D]. 陆欣.南昌大学 2018
[3]玉米赤霉烯酮胶体金免疫层析试纸条的研制[D]. 赵红艳.南京农业大学 2015
[4]赭曲霉毒素A模拟表位二级库的构建及其全抗原的生物合成[D]. 贺贞云.南昌大学 2014
本文编号：3694772
【文章页数】：97 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语
第1章 文献综述
1.1 玉米赤霉烯酮及其研究进展
1.1.1 玉米赤霉烯酮的结构及理化性质
1.1.2 F-2毒理性质
1.1.3 F-2的限量标准
1.1.4 F-2检测方法的研究进展
1.2 噬菌体展示环肽的研究进展及应用
1.2.1 噬菌体展示技术简介
1.2.2 噬菌体展示环肽技术
1.2.3 噬菌体展示环肽技术的应用
1.3 真菌毒素抗原模拟物的研究进展
1.3.1 噬菌体展示多肽
1.3.2 抗独特型抗体
1.3.3 体外重组蛋白表达系统研究进展
1.4 本课题研究的内容和意义
1.4.1 研究意义
1.4.2 研究内容
第2章 噬菌体展示F-2模拟表位肽的淘选及鉴定
2.1 实验材料、仪器和试剂
2.1.1 实验材料
2.1.2 实验仪器
2.1.3 实验试剂
2.2 实验方法
2.2.1 噬菌体展示F-2模拟表位肽的亲和淘选
2.2.2 噬菌体展示F-2模拟表位肽的活性鉴定
2.2.3 建立基于噬菌体展示F-2模拟表位肽的标准曲线
2.3 实验结果
2.3.1 噬菌体展示F-2模拟表位肽的亲和淘选
2.3.2 阳性克隆的鉴定
2.3.3 阳性克隆的特异性鉴定
2.3.4 噬菌体多肽阳性克隆氨基酸序列鉴定
2.3.5 建立基于噬菌体展示F-2模拟表位肽的标准曲线
2.4 讨论
2.4.1 影响淘选的因素
2.4.2 阳性克隆氨基酸序列分析
2.5 小结
第3章 基于噬菌体展示环七肽的F-2全抗原生物合成
3.1 实验材料、仪器和试剂
3.1.1 实验材料
3.1.2 实验仪器
3.1.3 实验试剂
3.2 实验方法
3.2.1 Peptides-MBP重组融合表达载体的构建
3.2.2 F-2全抗原Peptide-MBP的生物合成
3.2.3 F-2全抗原Peptide-MBP活性验证
3.3 实验结果
3.3.1 Peptide-MBP重组融合表达载体的构建
3.3.2 Peptides-MBP重组融合蛋白的原核表达
3.3.3 Peptides-MBP全抗原的免疫分析性能鉴定
3.4 讨论
3.5 小结
第4章 F-2多肽模拟表位-荧光素酶融合蛋白的原核表达
4.1 实验材料、仪器和试剂
4.1.1 实验材料
4.1.2 实验仪器
4.1.3 实验试剂
4.2 实验方法
4.2.1 pET-22b-Peptide-Nluc融合表达载体的构建
4.2.2 Peptide-Nluc融合蛋白的原核表达及纯化
4.2.3 Peptide-Nluc融合蛋白的活性分析
4.2.4 基于Peptide-Nluc直接竞争一步生物荧光酶联免疫分析法的建立
4.3 实验结果
4.3.1 F-2多肽-荧光素酶融合蛋白表达载体的构建
4.3.2 Peptide-Nluc融合蛋白的原核表达
4.3.3 Peptide-Nluc融合蛋白活性验证
4.4 小结
第5章生物合成抗原模拟物介导的三重荧光免疫层析技术的应用研究
5.1 实验材料、仪器和试剂
5.1.1 实验材料
5.1.2 实验仪器
5.2 实验方法
5.2.1 三重试纸条原理图
5.2.2 生物合成全抗原的原核表达及纯化
5.2.3 试纸条的组装
5.2.4 荧光探针的制备
5.2.5 荧光试纸条参数的优化
5.2.6 荧光试纸条检测性能的评估
5.3 实验结果
5.3.1 荧光探针的制备及表征
5.3.2 试纸条参数的优化
5.3.3 三重荧光试纸条半定量检测标准曲线
5.3.4 三重荧光试纸条特异性评估
5.3.5 三重荧光试纸条准确度及精密度分析
5.4 讨论
5.4.1 影响试纸条灵敏度的因素
5.4.2 生物合成抗原的成本分析
5.5 小结
第6章 结论与展望
6.1 结论
6.2 展望
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间的研究成果
【参考文献】：
期刊论文
[1]竞争性酶联免疫法快速检测高产奶牛精料补充料中玉米赤霉烯酮[J]. 李晓波,李慧娟,宋鸽,何娇,王克超,杨小剑,陈海燕,刘海旭. 食品安全质量检测学报. 2020(01)
[2]玉米赤霉烯酮检测方法研究进展[J]. 谭新柳,黄菲,缪文俊,明灯明,杨雅琼. 南京工业大学学报(自然科学版). 2020(01)
[3]超高效液相色谱-串联质谱法检测玉米油中的黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮[J]. 王丽英,任贝贝,路杨,刘印平,冯静,常凤启. 食品安全质量检测学报. 2019(12)
[4]重组蛋白微生物表达系统的研究进展[J]. 黄浩,王阳,堵国成,康振. 生物产业技术. 2019(03)
[5]玉米赤霉烯酮毒性的研究进展[J]. 杨美璐,吴峰洋,刘静慧,刘亚娟,陈宝江,谷子林,陈赛娟. 饲料研究. 2019(01)
[6]液相色谱法测定酱油中的玉米赤霉烯酮含量[J]. 乌吉木,高祥. 食品安全导刊. 2018(18)
[7]家禽饲料中玉米赤霉烯酮化学发光酶联免疫分析方法的建立[J]. 熊挺,蒋蔚,韩阳瑞,龙梦瑶,凌娇,王权,孙卫东. 畜牧与兽医. 2018(02)
[8]脱氧雪腐镰刀菌烯醇的环七肽模拟表位筛选[J]. 余鹃,贾彦琼,骆敏儿,王宏. 食品工业科技. 2017(24)
[9]剖析基因重组蛋白的表达系统与分离纯化的进展[J]. 孙世栋. 黑龙江科技信息. 2017(15)
[10]玉米赤霉烯酮对体外培养猪卵巢颗粒细胞的影响[J]. 周宏超,刘晓强,杨鸣琦,赵煜,李引乾. 中国兽医学报. 2017(02)
博士论文
[1]花状纳米金及抗独特型纳米抗体在真菌毒素免疫学检测中的应用研究[D]. 季艳伟.南昌大学 2017
[2]抗独特型纳米抗体的亲和力成熟及检测伏马菌素B1绿色免疫分析方法的研究[D]. 舒梅.南昌大学 2016
[3]基于模拟表位的玉米赤霉烯酮全抗原生物合成及其免疫学检测性能的研究[D]. 何庆华.南昌大学 2012
硕士论文
[1]玉米赤霉烯酮对小鼠肠道黏膜及IPEC-J2细胞损伤作用的研究[D]. 王新.吉林大学 2019
[2]特异性识别Cry1Ab多肽分子元件的构建及其在电化学免疫传感器的初步应用研究[D]. 陆欣.南昌大学 2018
[3]玉米赤霉烯酮胶体金免疫层析试纸条的研制[D]. 赵红艳.南京农业大学 2015
[4]赭曲霉毒素A模拟表位二级库的构建及其全抗原的生物合成[D]. 贺贞云.南昌大学 2014
本文编号：3694772
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