人参BBM基因全长cDNA克隆与序列分析

发布时间：2020-04-28 07:29

【摘要】：人参是一种多年生草本植物,作为中草药在中国已有几百年的历史。人参的优良品种稀少,生长周期较长,育种过程较难,随着人参需求的加大,人参育种工作成为科学家们的研究重点。育种工作是人参繁殖的首要难题。体细胞胚发生(Somatic Embryo genesis)是体外诱导植株再生的重要手段体细胞胚发生可以不经性细胞融合,而在特定条件下诱导新个体的形成,已成为研究植物胚胎发育的重要途径。这种方法可以在较短时间内培育出更多的优良品种,人参体细胞胚发生的研究可以为人参育种困难等问题提供良好的解决方法。但离体培养的胚性细胞的分化需要诱导因子的作用及相关基因的表达,根据相关文献发现拟南芥或甘蓝型油菜BBM基因在烟草中的异源表达增强了烟草再生能力并诱导自发愈伤组织、根和芽的形成,由此推测BBM基因与人参体细胞胚发生可能有关。本文以人参种子为材料,设计该基因的兼并引物,通过RACE法成功克隆人参种子中的BBM基因。近年来,从植物中分离出大量的转录因子,AP2/EREBP家族是其中之一,其转录因子与植物的生长发育和应激反应密切相关。根据拟南芥中BBM基因在NCBI上搜索发现BBM基因属于AP2(APETALA2)亚家族的转录因子。BBM基因在体细胞胚发生中起到关键的调节作用。本研究利用RACE技术克隆了人参BBM基因的全长cDN A序列,并对该基因进行生物信息学分析。研究结果如下:1、从人参中克隆的BBM基因全长cDNA长度为2256bp,包含由2010个碱基所构成的开放阅读框(ORF),编码由669个氨基酸所组成的蛋白。2、BBM基因编码的蛋白的相对分子量为73.57 KDa,等电点(PI值)为6.02;该蛋白包含euANT2-euANT6、bbm-1等基序和两个AP2结构域(AP2-R1和AP2-R2),属于AP2亚族的转录因子。人参BBM基因与烟草、大豆、苜蓿的BBM基因亲缘关系较近。本研究中通过RACE方法成功地克隆人参BBM因基(PgBBM),并进行序列分析和蛋白功能的预测,这为利用BBM基因诱导人参体细胞胚以及进行相关研究奠定理论基础。
【图文】：

２．３．邋２人参基因中间片段的扩增逡逑２．３．逦２．１人参基因退火温度的选择逡逑梯度ＰＣＲ结果如（图２）所示，基因在退火温度分别为４０、逡逑４１、４８°Ｃ时发现特异性条带，在４１°Ｃ时特异性条带Ｍ亮，因此将／ｉ／？Ｍ逡逑基因片段克隆的退火温度设定为４ＰＣ。逡逑图２逦基因梯度退火温度ＰＣＫ电泳图逡逑Ｆｉｇ．２邋ＢＢＭ邋ｇｅｎｅ邋ｇｒａｄｉｅｎｔ邋ｉｕｉｎｅａｌｉｎｇ邋ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ邋ＰＣＲ邋ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ逡逑注：８个梯度温度从左至右依次为４０、４１、４４、４８、５２、５６、５８、６０°Ｃ逡逑Ｎｏｔｅ：Ｅｉｇｈｔ邋ｇｒａｄｉｅｎｔ邋ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ邋ｆｒｏｍ邋ｌｅｆｔ邋ｔｏ邋ｒｉｇｈｔ邋ａｒｅ邋４０，邋４１，邋４４，邋４８，邋５２，邋５６，邋５８，邋６０邋°（逡逑２．邋３．邋２．邋２邋／ＷＭ基因片段ＰＣＲ电泳检测逡逑爪从总ＲＮＡ逆转录获得的ｃＤＮＡ扩增ＰＣＲ＾邋，在琼脂糖凝胶Ｉ．屯泳检逡逑测和分离扩增产物，，Ｈ标条带在约１３００ｂｐ处（如阁３邋），这Ｕ沏Ｈｌｊ的片ｆｔ逡逑人小－致．逡逑１４逡逑

图１总ＲＮＡ提取电泳图逡逑．ｌ邋Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｅｒｏｇｒａｍ邋ｏｆ邋ｔｏｔａｌ邋ＲＮＡ邋ｅｘｔｒａｃｔｉ基因中间片段的扩增逡逑基因退火温度的选择逡逑果如（图２）所示，基因在退火异性条带，在４１°Ｃ时特异性条带Ｍ火温度设定为４ＰＣ。逡逑
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S567.51;Q943.2

【参考文献】

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本文编号：2643218