适于棘尾虫(Stylonychia)基因功能研究的CRISPR技术研究
【图文】:
哈尔滨师范大学硕士学位论文因此,本研究以浮萍棘尾虫为研究对象,,以最新的基因敲除技术 CRISPR/Cas作为研究目标,探索适合于棘尾虫基因功能研究的 CRISPR 体系的构建,以期为自由生纤毛虫基因功能的研究提供技术支持和参考思路,更为真核生物基因的遗传进化分析奠定基础,也为进一步研究纤毛虫乃至高等动物细胞生命活动的分子生物学机制提供依据和参考。1.6 研究方案本研究首先在实验室建立浮萍棘尾虫原培养体系,然后用 G418 对浮萍棘尾虫进行抗性筛选,与此同时根据密码子偏好性研究得出的最优密码子来突变载体进而构建适合棘尾虫的敲除载体,然后根据靶点设计gRNA并构建识别靶点载体最后验证靶基因是否被敲除。具体技术路线如图 1-1:
.5%的区间),则基因表达水平(表达)被鉴定为基因中 PC 评[50]。果码子组成分析 CodonW 软件对浮萍棘尾虫全基因组编码序列进行分析。浮萍 含量范围为 22.1% 58.6%,GC 含量主要分布在 25% 40%,表明基因组中有 AT 富集(见图 2-1)。ENC 的取值范围为 20~映的密码子偏性的强弱,当 ENC 为 20 时,表示同义密码子,表示同义密码子没有偏倚;按照惯例以 35 作为偏性强弱的区虫基因组 ENC 取值范围在 24.8~61 之间,并且大部分大于 4密码子偏性较弱。密码子第 3 位 GC 的平均含量为 33.7%,G8.68%和 30.1%,说明密码子碱基组成多为 A 和 U。
【学位授予单位】:哈尔滨师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2019
【分类号】:Q78
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本文编号:2654268
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