带有β-tail的QueF-Like酶的表达及纯化研究

发布时间：2020-05-16 11:05

【摘要】：古细菌(Archara)又被称之为古生菌。它们与原核生物既有很多的相似之处,同时也拥有真核生物的某些特征。古菌分两大类,广古菌(Euryarchaeota)以及泉古菌(Crenarchaeota)。古嘌苷(Archaeosine,G+)是在古菌tRNA中被发现的一种高度修饰的核苷。经研究发现,在泉古菌中参与古嘌苷合成途径中的QueF-like酶与细菌的QueF酶具有同源性。人们在细菌中克隆了 QueF基因,并且通过对QueF的催化活性的研究,发现了 QueF具有腈类还原酶活性。而腈类还原酶具有良好的应用前景。因此研究来自泉古菌的QueF-like酶的活性也具有重要意义。根据报道,带有β-tail的融合蛋白可以在细菌中表达,与β折叠纤维化短肽混合时,可以共同诱导组装成纳米纤维结构,进而提高酶的催化效率及稳定性。所以本实验选取泉古菌Pvrobaculum calidifontis的QueF-like基因,在其C-端加上β-tail的编码序列,由大连的宝生物公司合成全序列。本研究通过基因重组技术,把已合成的全序列从pUC-19中切除,然后插入到载体pET-28a上,重新构建了重组表达载体pET-28a-QueF-Like-β-tail,然后在大肠杆菌中对带有β-tail的QueF-like酶蛋白进行了表达,并对其进行了纯化。SDS-PAGE电泳检测表示,目的蛋白已成功表达。此研究为后续的QueF-like酶的纳米纤维的组装打下了基础。
【图文】：

图２喹啉的生物合成途径中ＱｕｅＦ的腈类还原酶活性［ｗ逡逑＇７０１逡逑

图４ｐＵＣ－ｌ９质粒图谱［２２］逡逑Ｆｉｇ４邋Ｔｈｅ邋ｐｌａｓｍｉｄ邋ｐｒｏｆｉｌｅｓ邋ｏｆ邋ｐＥＴ－２８ａ邋（邋＋邋）邋Ｃ２２］逡逑（２）邋ｐＥＴ－２８ａ邋（邋＋邋）质粒为本实验室所保存的通用表达载体，由Ｎｏｖａｇｅｎ公司逡逑
【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：Q78

【参考文献】

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1 王剑飞;申之义;;反刍动物瘤胃内古菌的研究进展[J];畜牧与饲料科学;2010年02期

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本文编号：2666641