组蛋白分子伴侣ASF1调控小鼠植入前胚胎发育机理研究

发布时间：2020-07-15 19:54

【摘要】：ASF1(Anti-Silencing Factor 1)是一种组蛋白分子伴侣,在哺乳动物中具有ASF1A和ASF1B两个亚型。在功能方面,对核小体组装、DNA损伤修复以及转录调控具有重要的意义。然而,当前针对ASF1在小鼠植入前胚胎发育过程中的功能所知甚少。因此,本研究重点探索对了ASF1在小鼠受精卵发育过程以及植入前胚胎发育过程中的功能。首先,我们对ASF1A和ASF1B在小鼠受精卵中动态进行了检测。通过获取小鼠受精卵各个发育阶段(受精后2 h、4 h、6 h、8 h、10 h)的细胞,利用免疫荧光技术对细胞核内蛋白进行定量研究。免疫荧光结果显示,ASF1A和ASF1B在小鼠受精卵各个发育阶段均有表达,并且随着雌雄原核的逐渐形成,二者在细胞核内的含量逐渐增加。其次我们通过免疫荧光以及实时荧光定量PCR对ASF1A和ASF1B在小鼠植入前胚胎发育各个阶段细胞核内的含量以及mRNA总量进行了检测。免疫荧光结果显示,ASF1A和ASF1B在卵子和植入前胚胎各个阶段均有表达,但具有不同的变化动态。ASF1A细胞核中的含量在桑椹胚阶段最低,而ASF1B在四细胞阶段细胞核中的含量最低。实时荧光定量PCR结果表明,AF1A和ASF1B mRNA总量在受精后显著减少,在桑椹胚阶段出现表达高峰。此外ASF1B mRNA总量在合子阶段也处于较高水平。接着,我们对ASF1在小鼠植入前胚胎发育过程中的功能进行了研究。利用ASF1A和ASF1B特异性的siRNA以及Morpholino(MO)分别从转录水平以及翻译水平对ASF1A和ASF1B进行了敲减,进一步研究ASF1在小鼠植入前胚胎发育过程中的作用。实验结果表明,ASF1A敲低对小鼠植入前胚胎发育影响很小,但ASF1B敲低导致小鼠植入前胚胎发育率显著降低。最后,因为ASF1B的敲低会导致植入前胚胎发育率显著降低,并且先前研究表明ASF1对H3K56具有乙酰化作用。因此我们通过MO将ASF1B进行敲低,收集囊胚,利用免疫荧光技术,探究H3K56乙酰化水平的变化状况。结果表明,ASF1B的敲低会导致囊胚阶段组蛋白H3K56乙酰化水平降低。
【学位授予单位】：内蒙古大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：Q344
【图文】：

带状图,二级结构,高酸性,染色质结构

内蒙古大学硕士学位论文谷氨酸残基）。其他核蛋白，如 HMG 蛋白和 Rad6 蛋白，在10]。这些蛋白参与核小体组装和拆卸、染色质结构和 DNA 谷氨酸可以在一定离子强度下组装核小体。这个高酸性区域他非组蛋白之间的作用来调节染色质结构。另外 TLK 磷酸守性的 C 末端部分[11,12]。但是这些特征在其他真核生物中 ASF1 的 C 末端区域完全缺乏。表明 C 末端的高酸性区域

组装过程,核小体,组蛋白,芽殖酵母

通过与 PCNA 相互作用将组蛋白组沉积到 DNA（图1.3A）[17,18]。从 Hela 细胞核的提取物中分离出了 CAF-1，由三个亚基构成的组蛋白 H3-H4 伴侣分子。在体外，CAF-1 能够把组蛋白组装到正在复制的 DNA 上[19]。在芽殖酵母细胞中，AB

DNA损伤,动态变化,磷酸化,去磷酸化

图 1.4 ASF1 在 DNA 损伤应答过程中的动态变化[43] DDC2-Mec1 识别 DNA 损伤后，Mec1 对 Rad53 进行磷酸化，导致 Rad53 与 ASF1 解离，Rad53 又度磷酸化。而 PP2C 能够使 Rad53 去磷酸化，使去磷酸化的 Rad53 又重新与 ASF1 相结合。如果损存在，Mec1 可以重新磷酸化 Rad53，并导致与 ASF1 解离和活化。与此同时，ASF1 结合组蛋白 H Rtt109 和 Rtt101 进行修饰，促进 H3-H4 的转移到 CAF-1，参与核小体组装，释放 ASF1，使其与d53 重新结合。Figure 1.4 Dynamic change ofASF1 during DNAdamage responseter a DDC2 Mec1 recognizes DSB, Mec1 phosphorylates Rad53, leading to Rad53 dissociation from Ad53 then undergoes hyperphosphorylation. PP2C dephosphorylates Rad53, and the dephosphorylated Radociates with Asf1. If the damage persists, Mec1 can re-phosphorylate Rad53 and lead to dissociation fromdre-activation.Inparallel,Asf1boundhistoneH3undergoesmodificationsbyRtt109andRtt101,whichfaci hand off of the H3 H4 histone dimer to CAF1, freeingAsf1 to re-interact with Rad53.

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