败育型植物表达载体的构建及功能验证

发布时间：2020-07-16 16:34

【摘要】：败育问题是植物界研究热点之一,在作物常规育种及生产制种方面有着广泛应用,运用败育型植物表达载体遗传转化是引发植物不育的一种快捷策略。本文分别克隆了拟南芥花分生组织及花器官特异基因AP1的启动子和大肠杆菌RNaseH基因的编码区,构建了败育型植物表达载体pHZM13-AP1-RNaseH,并通过电击法将其导入农杆菌EHA105。以烟草C151为受体材料,经农杆菌介导遗传转化,共获得转化株35株。花粉管萌发试验表明,转化株花粉同对照间萌发活力并无差别;称取种子百粒重,转化株平均为6.6mg,对照株平均为9.1mg,表明二者差别显著。进一步电镜扫描种子表面,发现转化株种皮表面褶皱状纹饰减少,成因不明。种子萌发试验表明,转化株种子发率较低,且表现萌发延迟。本研究表明,该败育型植物表达载体极度削弱了宿主植物的育性,但自杀基因并未影响花器发生,这可能同所用启动子在异源表达背景下作用活性改变有关。
【学位授予单位】：牡丹江师范学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：Q943.2
【图文】：

物理图谱,物理图谱,启动子,载体

ＰａｃＩ逡逑图２－１邋ｐＨＺＭ１３载体物理图谱逡逑Ｆｉｇ．２－１邋Ｔｈｅ邋ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ邋ｏｆ邋ｐＨＺＭ邋１３邋ｖｅｃｔｏｒ逡逑Ｈ基因与ＡＰＩ启动子逡逑（Ｇｅｎｂａｎｋ登录号Ｋ００９８５．１邋），来源于大肠杆菌。逡逑

特异性引物,菌液,特异性,模板

N１．１邋ＲＮａｓｅＨ基因的获得逡逑以大肠杆菌菌液为模板，用ＲＮａｓｅＨ的特异性引物进行菌液ＰＣＲ扩增，反逡逑应产物用１％琼脂糖凝胶电泳检测，扩增出４７４ｂｐ的特异性条带（见图３－１），并逡逑将ＰＣＲ产物进行测序。逡逑图３－１邋ＲＮａｓｅＨ扩增结果（图中标准分＿了－量Ｍａｒｋｅｒ为ＤＬ５０００）逡逑Ｆｉｇ．３－１邋Ｔｈｅ邋ｒｅｓｕｌｔ邋ｏｆ邋ＲＮａｓｅＨ（ＤＬ５０００邋Ｍａｒｋｅｒ）逡逑３．１．２邋ＡＰＩ启动子的获得逡逑以拟南芥基因组ＤＮＡ为模板，用ＡＰＩ的特异性引物进行ＰＣＲ扩增，将ＰＣＲ逡逑反应产物用１％琼脂糖凝胶电泳检测，扩增出约３．３５邋Ｋｂ的特异性条带（见图３－２）。逡逑蠢逡逑图３－２邋ＡＰＩ扩增结果（图中标准分子量Ｍａｒｋｅｒ为ＤＬ５０００＞逡逑Ｆｉｇ．３－２邋Ｔｈｅ邋ｒｅｓｕｌｔ邋ｏｆ邋ＡＰ１（ＤＬ５０００邋Ｍａｒｋｅｒ）逡逑－１９－逡逑

准分子,特异性引物,菌液

【参考文献】