促进亳菊生长和绿原酸积累菌株的筛选及其机制初探

发布时间：2020-07-19 13:00

【摘要】：本研究以亳菊为实验材料,利用实验室已有的亳菊内生菌和非内生菌株,与组培苗共生培养,通过生理生化试验、活性物质测定试验、转录组等手段,筛选出促进亳菊生长和活性物质积累的菌株,并对其活性物质积累的分子机制进行初步研究,将为今后在农业上的开发应用奠定重要基础。本研究主要内容及结果如下:1.亳菊的组织培养体系建立:以茎段、茎尖、叶片作为外植体分别做组织培养,发现茎尖的成活率最好;通过优化组织培养基配方,最后选择适合诱导愈伤组织的培养基为1/2MS+琼脂8.5 g/L+蔗糖30.0 g/L,pH 5.8,适合生根和增殖的培养基为MS+琼脂8.5 g/L+蔗糖30.0 g/L,pH 5.8。2.功能菌株的初筛:将前期分离得到的14株菌株接种亳菊组培苗,共生培养15天后,观察亳菊组培苗存活情况、长势,测定株高、根长、根数等生长指标,初步筛选出对亳菊组培苗有促生长作用的促生长亳菊内生菌BJF10和BN7。3.功菌株的复筛:与内生菌共生培养15 d后的亳菊组培苗炼苗一周后移栽至温室大棚,一个月后分别测定接菌组和不接菌对照组亳菊的生理指标,包括叶片叶绿素含量、MDA(丙二醛)含量、根系活力、可溶性糖含量、PAL(苯丙氨酸解氨酶)酶活。结果发现,接种BJF10的亳菊叶片叶绿素含量与对照相比,达到了显著性差异;接种BN7的亳菊叶片与对照相比,MDA含量下降了;同时发现BJF10,BN7均不同程度地提高了亳菊的根系活力、可溶性糖含量、PAL酶活性。4.促生菌对亳菊叶片绿原酸含量的影响:对样品处理、流动相及检测波长条件进行优化,建立测定绿原酸含量的HPLC方法,通过对内生菌BJF10、BN7处理组亳菊叶片绿原酸含量测定,结果发现,内生菌BJF10、BN7均能提高叶片绿原酸含量,其中BJF10为不接菌对照组的2倍,说明内生菌BJF10和BN7能明显提高亳菊活性物质。5.转录组分析:对内生菌处理组和对照组亳菊叶片组织样本进行转录组测序,重点分析活性物质代谢相关基因的差异表达谱,以期从分子水平上揭示菌株对亳菊叶片基因表达水平的影响。综上所述,本研究筛选获得菌株BJF10和BN7,能促进亳菊生长和活性物质绿原酸的积累,为今后研制农用微生物复合菌剂等产品奠定了基础。
【学位授予单位】：阜阳师范学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：Q93
【图文】：

组培苗,共培养,生长情况,内生菌

生长菌株的筛选逐步打开培养瓶口，每天喷洒适量水使植株保持一定，根部洗净培养基，对各处理组亳菊苗生物量、叶片状进行测定。统计的株高、根数，之后移入花盆营养)中培养。果与分析进亳菊组培苗生长内生菌的筛选用14株亳菊内生菌，通过回接亳菊组培苗，培养3周，内生菌回接后亳菊组培苗存活率达到100%（见表2.1）菊的生长速度、叶片数量、株高、根数等方面具有比未征。跟据亳菊苗生长情况，初步筛选出2株亳菊内生菌进一步研究，结果如图2-1所示。A B

组培苗,共培养,生长情况

图 2-2 BN7 与组培苗共培养生长情况 A: BN7 B: CKure 2-2 Co-culture growth of BN7 and tissue culture seedlings A: BN7 B图 2-3 BN14 与组培苗共培养生长情况 A: BN14 B: CKre 2-3 Co-culture growth of BN14 and tissue culture seedlings A: BN14 A B

组培苗,共培养,生长情况

9图 2-3 BN14 与组培苗共培养生长情况 A: BN14 B: CKre 2-3 Co-culture growth of BN14 and tissue culture seedlings A: BN14 表 2-1 亳菊内生菌对亳菊组培苗生长情况的影响ffect of endophytic fungi on the growth of tissue culture seedlings of C.mori存活率菌在组培苗周围的形态组培苗100％菌株不生长叶片青绿50％菌浅灰色，表面有褶皱，背面灰色，长满培养基植株下部正常生长

【参考文献】