蝉花微生物群落结构研究及优势真菌的分离培养

发布时间：2020-11-13 19:00

　　 蝉花是一种历史悠久的药食用真菌,含有多糖、虫草酸、核苷类、甾醇类以及多肽类等生物活性物质。随着自然环境的变化,天然蝉花资源稀缺,因此通过人工进行蝉花培育成为科研工作的一个热点。本文从分析蝉花子实体的微生物群落结构入手,找出其中的关键菌株,再对关键菌株进行分离以选育出发酵性状优良的菌株,进而开展纯种的发酵培养研究,通过添加蚕蛹粉的发酵模拟培养出与子实体成分接近的虫菌复合物。论文的主要工作如下:(1)采用高通量测序技术,分析了不同产地、不同部位以及不同发育阶段的野生蝉花子实体的微生物群落结构。Isaria cicadae在不同产地的蝉花子实体真菌群落中处于优势地位,其中OTU6782为优势OTU,而蝉花细菌群落的结构由于产地不同而发生明显变化。Isaria cicadae在蝉花子实体不同部位(表面泥土、孢梗束、菌皮、带泥菌皮以及菌核)的真菌群落中均处于优势地位,其中OTU6782相对丰度最高。在蝉花子实体发育过程中,Isaria cicadae迅速占据真菌群落优势地位,且该物种具有丰富的种内多样性,其中OTU6782为优势OTU,此外OTU12109,OTU13152,OTU486,OTU2297,OTU11491,OTU246,OTU58,OTU2950,OTU8787,OTU73,OTU130等细菌与Isaria cicadae在蝉花发育过程中共同存在。(2)从蝉花子实体中分离了Isaria cicadae 8196、82542、81957和TZC-3菌株,对其进行了ITS和18S rRNA基因序列分析,并通过液态发酵培养筛选出发酵性能较为优良的菌株。分子学及形态学鉴定表明,8196、82542、81957和TZC-3菌株的ITS rRNA基因序列与Isaria cicadae相似性在99%以上,与野生蝉花真菌OTU6782序列相似性最高达到99.65%。对4株菌分别进行液态培养,发现不同菌株在生物量、胞内外多糖含量、胞内外核苷含量存在一定的差异,其中TZC-3菌株在生物量、胞内多糖总量以及腺苷的产量和产率上都呈现明显的优势,因而选择该菌株用于后续实验研究。(3)考察了蝉蛹粉对Isaria cicadae TZC-3发酵过程的影响,分析了蝉蛹粉强化发酵蝉花菌丝体的成分组成。结果表明,蝉蛹粉的添加可在一定程度上促进蝉花菌丝体中胞内多糖、腺苷和N6-(2-羟乙基)-腺苷(HEA)的合成,其中添加4%蝉蛹粉发酵的强化菌丝体质量较高,胞内多糖产率为14.55 mg/g,胞内多糖产量为74.78 mg/100 mL;腺苷产率为1.22 mg/g,产量为6.66 mg/100 mL;HEA产率为1.58 mg/g,产量为8.63mg/100 mL。与对照组菌丝体和蝉蛹粉相比,强化菌丝体的成分(一般成分、水解氨基酸、游离氨基酸、水解单糖、脂肪酸)与野生蝉花子实体更加接近,其中部分游离氨基酸(天冬氨酸、丝氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸和脯氨酸)和水解后的单糖(阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖和木糖)含量提高最为明显。
【学位单位】：江南大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：Q93-33;S567.39
【部分图文】：

蝉花、蝉茸、虫花、蝉草和胡蝉，是与冬虫夏草、蛹虫草相提并论的另 400 多种[1]，但具有较高药用价值且其中，中医认为蝉花味甘、性寒，效与冬虫夏草和蛹虫草近似的优质江以南，包括四川、江苏、浙江、福、南韩等地区也有分布[2]。一般来说大，有竹蝉活动，枯枝落叶层比较厚体长度 15-80 mm 左右，主要由虫体3.5 cm，直径 1-1.4 cm，形状与蝉若mm，是最外层乳白色包裹虫体的结“菌核”是真菌利用蝉的营养物质生长，呈长条形或棒状，新鲜时白色，白色或淡黄色的花粉，即为蝉花孢蛹虫草更容易获得，并且蝉花的形境的代表产物。

第一章 绪论蝉若虫上，逐渐生长出芽管并同时分泌几丁质酶，从而穿过蝉蛹坚硬的外壳进入到内部，侵入的部分菌丝通过出芽的方式增生，并且产生丰富的代谢物质使虫体致死，虫体的营养物质生长逐渐被菌丝利用侵染逐渐成为菌核，最终形成蝉花虫菌复合体，成熟的蝉花产生孢子进一步侵染更多的蝉蛹[4-6]（图 1-2）。对于蝉花生长过程和侵染机制的研究为后来研究虫生真菌与寄主之间的相互关系、蝉花的形成机制和过程及通过模拟自然生长条件人工培育蝉花奠定了基础。

其中腺苷（图1-3A）、N6-(2-羟乙基)-腺苷（图 1-3B）由于具有良好的药用价值和滋补作用成为人们关注的热点，同时也是虫草类制品的质量控制指标。在蝉花核苷的研究中，Wang 等[40]通过在蚕蛹上固态培养出蝉花子实体并测定了其中腺苷和虫草素的含量，结果表明其中腺苷和虫草素含量分别为 1421.45 μg/g 和 1398.12 μg/g；Olatunji 等[14]评价了来自蝉拟青霉的腺苷对谷氨酸诱导的 PC12 细胞中的氧化应激的保护作用，结果显示腺苷增加 GSH-Px和 SOD 的活性，保留线粒体膜电位（MMP），增加 Bcl-2/Bax 比率，并降低 ERK，p38和 JNK 的表达
【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 苏梅香;林方才;王蕾;;58例真菌感染临床分析[J];中国水电医学;2005年02期

2 马强;郭琼杰;白东玉;温洋;;恶性肿瘤患者放化疗后真菌感染的耐药性分析[J];热带医学杂志;2018年12期

3 江琰笛;;某医院膝关节骨性关节炎真菌感染危险因素分析[J];中国消毒学杂志;2019年01期

4 王熊飞;荣阳;;慢性阻塞性肺疾病并发真菌感染的临床分析与前瞻性研究[J];中国医药指南;2018年04期

5 江宝林;;氟康唑两种常用剂量预防新生儿重症监护室高危患儿真菌感染的效果比较[J];基层医学论坛;2018年15期

6 孙凯;马开富;;多中心重症急性胰腺炎并发真菌感染的病原学检验[J];中国老年学杂志;2018年10期

7 周江慧;吴昆哲;徐晓华;;真菌感染的2例病例报道及相关文献复习[J];中国实验诊断学;2018年08期

8 任丽娟;郑文亮;李智;;(1,3)-β-D葡聚糖检测对不同部位真菌感染的诊断价值[J];中国实验诊断学;2018年11期

9 王兴;杨柳;贺曦;张敏;;脑脊液(1,3)-β-D-葡聚糖在颅内真菌感染诊治的价值[J];中国真菌学杂志;2017年02期

10 潘炜华;;真菌感染,就在你身边[J];皮肤科学通报;2017年05期

相关博士学位论文 前9条

1 秦明森;AM真菌与土壤微生物群落和功能的关系研究[D];兰州大学;2019年

2 王志东;伊曲康唑γ-干扰素对真菌感染小鼠免疫功能的影响[D];第二军医大学;2004年

3 王雅玲;养殖环境真菌气溶胶及相关真菌毒素的检测[D];山东农业大学;2006年

4 谢郭豪;脓毒症真菌感染流行病学特征和防御素遗传变异[D];浙江大学;2010年

5 孙晓红;真菌感染的流行病学分析及主要病原真菌检测方法的研究[D];吉林大学;2011年

6 施继敏;异基因造血干细胞移植后侵袭性真菌感染危险因素分析及预防策略[D];浙江大学;2013年

7 张伟宏;真菌感染小鼠角膜过程中菌丝和主要炎症细胞动态变化的研究[D];郑州大学;2010年

8 屠振华;DCD肝移植术后感染的高危因素研究[D];浙江大学;2015年

9 王瑞珍;伊氏线虫真菌比较基因组及其内生细菌的研究[D];中国林业科学研究院;2017年

相关硕士学位论文 前10条

1 淳于彦洁;蝉花微生物群落结构研究及优势真菌的分离培养[D];江南大学;2019年

2 范春兰;西安市大气真菌群落分布特性及其影响因素研究[D];长安大学;2019年

3 王棕杨;荧光染色法在真菌感染诊断中的效率比较[D];西南医科大学;2019年

4 邹晨;一期翻修联合关节腔内注射抗真菌药物治疗慢性假体周围真菌感染的效果评价[D];新疆医科大学;2019年

5 冯丽;南海部分海洋沉积物真菌多样性及可培养真菌抗菌和产酶活性初步研究[D];上海交通大学;2017年

6 向奇;大熊猫被毛可培养真菌的分离鉴定与系统发育学分析及酵母菌药敏试验[D];四川农业大学;2016年

7 汤进;抗真菌药物预防与治疗移植术后真菌感染的Meta分析[D];南华大学;2018年

8 刘波;PICU侵袭性真菌血流感染21例临床分析[D];中国医科大学;2018年

9 刘金兰;CT联合鼻内镜对真菌性上颌窦炎的诊断价值[D];广西医科大学;2018年

10 涂杰;新型抗真菌先导物的设计、合成和生物活性研究[D];中国人民解放军海军军医大学;2018年

本文编号：2882516