小鼠精原干细胞分离、纯化与去分化研究
发布时间：2020-12-07 06:56
精原干细胞（spermatogonial stem cells,SSCs）是哺乳动物体内唯一可以将遗传信息传递给下一代、功能单一的干细胞,体外分离培养SSCs为探索其生物学特性及其增殖、分化与去分化机制奠定了基础。SSCs在特定的体外培养条件下,即使无外源基因操作也可以重编程形成多能干细胞。多能干细胞不仅具有自我复制的能力,而且具有形成多种组织和细胞的能力,具有很大的潜在应用前景。诱导性多能干细胞（induced pluripotent stem cells,iPSCs）虽然在体内外可分化形成三胚层,但由于外源基因的插入使其应用受到制约。因此,SSCs更适用于人类临床及动物分子育种应用。本研究分为两部分,第一部分实验以小鼠作为动物模型,分离、纯化并体外培养小鼠精原干细胞（mouse spermatogonial stem cells,m SSCs）。采用机械分离法、两步酶消化法结合连续差速贴壁法成功分离、纯化得到来源于Oct4/GFP×CD1杂交品系F1代小鼠睾丸的mSSCs,并对体外培养的mSSCs进行鉴定分析。当细胞稳定生长时,通过观察细胞形态、碱性磷酸酶染色、免疫荧光染色、RT-...
【文章来源】：内蒙古大学内蒙古自治区 211工程院校
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
饲养层细胞形态
图 2.2 差速贴壁法富集的 mSSCs 形态A：培养 45 min 后贴壁的细胞 B：培养 1 h 后悬浮的细胞C：培养 2 h 后悬浮的细胞 D：过夜培养后的细胞Figure 2.2 The morphology of mouse Spermatogonial Stem Cells enriched by differential adhesion methoA: cells adhered for 45 minutes. B:not adhered cells cultured for 1 hour.C: Suspended cells cultured for 2 hours. D: Cells cultured overnight.3.3 mSSCs 的形态将经过过夜贴壁富集的细胞接种到饲养层细胞上进行培养，2 d 后开始增殖，4 d 后度显著提高，7 d 左右可见到经典的葡萄状克隆。以后每 7 d 进行一次传代，在体外传时细胞形态没有发生变化。由于本实验使用的小鼠睾丸来源于 GFP 转基因小鼠，因此
图 2.3 mSSCs 形态A：小鼠 SSCs 在饲养层细胞上培养 7 d 的形态 B：小鼠 SSCs 体外培养第 6 代的形态C、D：体外培养小鼠 SSCs 的绿色荧光表达情况Figure 2.3 The morphology of mouse spermatogonial stem cells.: Morphology of mouse SSCs cultured on feeder cells for 7 days. B: Morphology of the sixth generatiomouse SSCs cultured in vitro. C、D:.GFP expression of mouse SSCs in vitro.4 mSSCs 碱性磷酸酶表达的检测结果在早期胚胎中，AP 活性较高，随着胚胎细胞的分化，其表达 AP 的水平逐渐降低，末端，细胞失去 AP 的活性。通常，干细胞中都会表达一定的 AP 活性。AP 在多能活性最强。因此，可以通过检测细胞是否表达 AP 阳性来确定其是否具有干性。如
本文编号：2902844
【文章来源】：内蒙古大学内蒙古自治区 211工程院校
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
饲养层细胞形态
图 2.2 差速贴壁法富集的 mSSCs 形态A：培养 45 min 后贴壁的细胞 B：培养 1 h 后悬浮的细胞C：培养 2 h 后悬浮的细胞 D：过夜培养后的细胞Figure 2.2 The morphology of mouse Spermatogonial Stem Cells enriched by differential adhesion methoA: cells adhered for 45 minutes. B:not adhered cells cultured for 1 hour.C: Suspended cells cultured for 2 hours. D: Cells cultured overnight.3.3 mSSCs 的形态将经过过夜贴壁富集的细胞接种到饲养层细胞上进行培养，2 d 后开始增殖，4 d 后度显著提高，7 d 左右可见到经典的葡萄状克隆。以后每 7 d 进行一次传代，在体外传时细胞形态没有发生变化。由于本实验使用的小鼠睾丸来源于 GFP 转基因小鼠，因此
图 2.3 mSSCs 形态A：小鼠 SSCs 在饲养层细胞上培养 7 d 的形态 B：小鼠 SSCs 体外培养第 6 代的形态C、D：体外培养小鼠 SSCs 的绿色荧光表达情况Figure 2.3 The morphology of mouse spermatogonial stem cells.: Morphology of mouse SSCs cultured on feeder cells for 7 days. B: Morphology of the sixth generatiomouse SSCs cultured in vitro. C、D:.GFP expression of mouse SSCs in vitro.4 mSSCs 碱性磷酸酶表达的检测结果在早期胚胎中，AP 活性较高，随着胚胎细胞的分化，其表达 AP 的水平逐渐降低，末端，细胞失去 AP 的活性。通常，干细胞中都会表达一定的 AP 活性。AP 在多能活性最强。因此，可以通过检测细胞是否表达 AP 阳性来确定其是否具有干性。如
本文编号：2902844
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