AlphaLISA检测葡萄球菌肠毒素B方法的建立及荧光功能化微球的制备

发布时间：2020-12-13 02:17

　　葡萄球菌肠毒素B（SEB）是金黄色葡萄球菌（金葡菌）产生的一种超抗原,具有极大的毒性,可以在很低的浓度下激活大量的CD4⁺T细胞。而细胞因子的大量产生会引发“细胞因子风暴”,进而导致急性毒性效应。作为一种重要的肠毒素,SEB不仅是食物中毒的主要原因,也是潜在的生物威胁,可以被发展成一种气溶胶化的生物武器。同时,因为SEB具有较大的毒性、稳定性和易获得性,美国国家疾病控制中心将其列为生化武器清单上的重要致病毒素。因此,对SEB进行快速准确的检测是非常重要和迫切的。AlphaLISA是一种基于两个微球的技术。当这两种微球彼此接近时,用波长为680 nm的光激发供体微球产生能量,将周围反应体系中的氧分子转变为激发态,并将能量传递给受体微球,最终产生520⁶20 nm的荧光。该技术操作便捷,反应用时少,均相免洗,并具有较高的灵敏度。本实验建立了AlphaLISA检测SEB的方法。对结果进行分析,采用非线性回归法进行AlphaLISA标准曲线的建立,缓冲液中SEB检测的线性范围为25 pg/mL至25 ng/mL,LOD为25 pg/mL,具有较高的灵... 

【文章来源】：军事科学院北京市

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

金黄色葡萄球菌的结构

第 2 页图 2 痰液样本中的葡萄球菌Fig 2 Staphylococcus in sputum sample菌能够产生许多毒素，这些毒素是根据它们的作用机制而分组的毒素，可引起孔洞形成，并诱发促炎[5]。由此引起的细胞损伤可原因之 。致热毒素与超抗氏族在结构上是相关的，具有多种共酸序列同源度。它们通过与主要的组织形成相容性复合物(Mhc挥超抗原的作用，从而引起广泛的 T 细胞增殖和细胞因子反应引起两种疾病，即TSST和食物中毒。在20%的金葡菌分离株中发。TSST-1 在蛋白质结构上与 SEB 更为相近。

图 3 葡萄球菌侵入组织的发病机制Fig 3 SPAthogenesis of Staphylococcal Invasion of Tissue金葡菌是 种食源性致病菌，因能诱发多种疾病而得到广泛的研究。经过研究发现，金葡菌主要有二十三种血清型的肠毒素。这二十三种毒素里，SEB 是导致不同条件下食物中毒如恶心、腹痛和呕吐等现象的常见原因。SEB 由 239 个氨基酸组成，分子量为 28,336。通过氨基酸分析，能够确定 SEB的完整序列[6]。SEB 的蛋白质序列与肠毒素 C1 的蛋白质序列具有广泛的同源性，C1 也由 239 个氨基酸组成。SEB 的前体分子量约为 32kb，被确认为产 SEB 金葡菌的膜组分。在携带克隆 SEB 基因(entB)的大肠杆菌菌株的细胞膜中也发现了 SEB前体。SEB 的作用机制尚不完全清楚，但其对腹腔脏器的催吐作用可能导致呕吐和腹泻[7]。

【参考文献】：
期刊论文
[1]基于生物条形码探针和金纳米颗粒的大肠杆菌O157:H7检测[J]. 蒲小平,杨海麟,周楠迪.  食品科学. 2011(08)
[2]种子聚合法制备单分散交联聚苯乙烯微球的研究[J]. 由英才,祁东风,张保龙,丁培元,杜宗杰,黄吉甫.  高分子材料科学与工程. 1994(06)



本文编号：2913704