剧毒鹅膏等温扩增检测及鹅膏毒素基因多样性研究
发布时间：2021-01-11 18:42
误食野生蘑菇中毒事件近年来在我国频频发生,已成为我国食物中毒事件中导致死亡的最主要因素,并且80%以上的蘑菇中毒死亡都是由剧毒的鹅膏菌所引起。中毒后蘑菇种类的早期鉴定对于中毒诊断和治疗具有非常重要的作用,然而,由于鹅膏菌物种的多样性以及往往中毒现场样本的不完整性,形态鉴定又需要专业分类工作者,同时,目前的分子生物学鉴定需要PCR仪和DNA测序,所需时间长,难以满足基层疾控和医疗单位对毒蘑菇中毒后需要快速鉴定毒源的要求。此外,目前剧毒鹅膏等含鹅膏毒素物种的转录组信息数据不足,相关毒素基因家族研究也正成为研究热点,还有更多新的环肽基因及其编码的肽类物质有待发现。本文从剧毒鹅膏等温扩增检测方法的建立、剧毒鹅膏等子实体的de novo转录组测序、鹅膏毒素基因及脯氨酰寡肽酶基因（POP）的多样性等方面展开了研究,主要结果如下:1.基于环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）,以内转录间隔区（ITS）作为靶序列,针对欧美的双孢鹅膏Amanita bisporigera、绿盖鹅膏A.phalloides以及我国的致命鹅膏A.exit...
【文章来源】：湖南师范大学湖南省 211工程院校
【文章页数】：138 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
α-AMA和PHA基因的cDNA和氨基酸序列的比对[61]
图1-3鹅膏环肽的生物合成Figure 1-3 Biosynthesis of Amanita cyclopeptides.1.4. 环介导等温扩增技术的研究进展环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification，LAMP）是一种新型的核酸分子扩增技术，在 2000 年由 Notomi 等日本科学家发明，该技术基于靶基因的 6 个不同区域设计 4 条引物，利用链置换型 Bst DNA 聚合酶在恒温条件（65 °C 左右）进行扩增反应，1 小时内即可实现 109-1010倍的核酸扩增[74]。1.4.1 LAMP 反应的原理
博士学位论文16图1-4 LAMP反应示意图Figture 1-4 Schematic representation of the LAMP reaction.A. 引物及结合位点；B. 哑铃结构形成阶段；C. 循环扩增阶段1.4.2 LAMP 的特点第一、特异性强。LAMP 反应需要四条特异性引物，分别对应靶基因上 6
【参考文献】：
期刊论文
[1]一起剧毒蘑菇新种假淡红鹅膏中毒事件调查研究[J]. 周亚娟,俞红,朱姝,章轶哲,李海蛟. 中国食品卫生杂志. 2018(05)
[2]广东省首起误食剧毒裂皮鹅膏菌所致食物中毒死亡分析[J]. 倪锡河,张泽武,黄琼,张巧利,叶新,张萌,邓旺秋. 中国食品卫生杂志. 2018(01)
[3]Smartphone-Imaged HIV-1 Reverse-Transcription Loop-Mediated Isothermal Ampliflcation（RT-LAMP） on a Chip from Whole Blood[J]. Gregory L.Damhorst,Carlos Duarte-Guevara,Weili Chen,Tanmay Ghonge,Brian T.Cunningham,Rashid Bashir. Engineering. 2015(03)
[4]致命天使之剧毒鹅膏[J]. 蔡箐,杨祝良. 生命世界. 2015(03)
[5]白斑综合症病毒超分支滚环检测试纸的构建及应用[J]. 赵玉然,尹伟力,岳志芹,李八方. 武汉大学学报(理学版). 2014(01)
[6]超高效液相色谱-电喷雾离子化-四级杆飞行时间串联质谱指纹图谱检测毒蕈中4种鹅膏肽类毒素[J]. 柳洁,丁文婕,何碧英,罗兰,黄蔷. 分析化学. 2013(04)
[7]大型经济真菌的DNA条形码研究——以我国剧毒鹅膏为例[J]. 蔡箐,唐丽萍,杨祝良. 植物分类与资源学报. 2012(06)
[8]环介导等温扩增法快速检测乳中阪崎肠杆菌[J]. 董鑫悦,满朝新,卢雁,郭颖,王今雨,杨相宜,郎友,庞心怡,姜毓君. 食品工业科技. 2013(05)
[9]环介导等温扩增法对乙肝病毒的快速检测和分型[J]. 马寅众,李琦,李奎,王岚,余晓丽,刘志国. 华中科技大学学报(医学版). 2012(01)
[10]一起淡玫红鹅膏菌中毒事件处置报告[J]. 曹若明,刘仲,张济,刘守钦,孙延斌,张军,刘素华,刘岚铮,曹小丽,贾堂宏. 山东大学学报(医学版). 2011(12)
本文编号：2971284
【文章来源】：湖南师范大学湖南省 211工程院校
【文章页数】：138 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
α-AMA和PHA基因的cDNA和氨基酸序列的比对[61]
图1-3鹅膏环肽的生物合成Figure 1-3 Biosynthesis of Amanita cyclopeptides.1.4. 环介导等温扩增技术的研究进展环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification，LAMP）是一种新型的核酸分子扩增技术，在 2000 年由 Notomi 等日本科学家发明，该技术基于靶基因的 6 个不同区域设计 4 条引物，利用链置换型 Bst DNA 聚合酶在恒温条件（65 °C 左右）进行扩增反应，1 小时内即可实现 109-1010倍的核酸扩增[74]。1.4.1 LAMP 反应的原理
博士学位论文16图1-4 LAMP反应示意图Figture 1-4 Schematic representation of the LAMP reaction.A. 引物及结合位点；B. 哑铃结构形成阶段；C. 循环扩增阶段1.4.2 LAMP 的特点第一、特异性强。LAMP 反应需要四条特异性引物，分别对应靶基因上 6
【参考文献】：
期刊论文
[1]一起剧毒蘑菇新种假淡红鹅膏中毒事件调查研究[J]. 周亚娟,俞红,朱姝,章轶哲,李海蛟. 中国食品卫生杂志. 2018(05)
[2]广东省首起误食剧毒裂皮鹅膏菌所致食物中毒死亡分析[J]. 倪锡河,张泽武,黄琼,张巧利,叶新,张萌,邓旺秋. 中国食品卫生杂志. 2018(01)
[3]Smartphone-Imaged HIV-1 Reverse-Transcription Loop-Mediated Isothermal Ampliflcation（RT-LAMP） on a Chip from Whole Blood[J]. Gregory L.Damhorst,Carlos Duarte-Guevara,Weili Chen,Tanmay Ghonge,Brian T.Cunningham,Rashid Bashir. Engineering. 2015(03)
[4]致命天使之剧毒鹅膏[J]. 蔡箐,杨祝良. 生命世界. 2015(03)
[5]白斑综合症病毒超分支滚环检测试纸的构建及应用[J]. 赵玉然,尹伟力,岳志芹,李八方. 武汉大学学报(理学版). 2014(01)
[6]超高效液相色谱-电喷雾离子化-四级杆飞行时间串联质谱指纹图谱检测毒蕈中4种鹅膏肽类毒素[J]. 柳洁,丁文婕,何碧英,罗兰,黄蔷. 分析化学. 2013(04)
[7]大型经济真菌的DNA条形码研究——以我国剧毒鹅膏为例[J]. 蔡箐,唐丽萍,杨祝良. 植物分类与资源学报. 2012(06)
[8]环介导等温扩增法快速检测乳中阪崎肠杆菌[J]. 董鑫悦,满朝新,卢雁,郭颖,王今雨,杨相宜,郎友,庞心怡,姜毓君. 食品工业科技. 2013(05)
[9]环介导等温扩增法对乙肝病毒的快速检测和分型[J]. 马寅众,李琦,李奎,王岚,余晓丽,刘志国. 华中科技大学学报(医学版). 2012(01)
[10]一起淡玫红鹅膏菌中毒事件处置报告[J]. 曹若明,刘仲,张济,刘守钦,孙延斌,张军,刘素华,刘岚铮,曹小丽,贾堂宏. 山东大学学报(医学版). 2011(12)
本文编号：2971284
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/swxlw/2971284.html
