改造和优化人干扰素α-2b基因序列并在大肠杆菌中做表达验证
发布时间：2021-01-23 05:28
提高外源基因的表达水平一直是生物技术探讨的热点问题。在理论上,探讨更有效的基因序列改造和优化方案,对于提高外源基因的表达水平具有重要意义和实用价值。本研究提出了针对人干扰素α-2b基因的改造和优化方案,期望在大肠杆菌中获得高效表达。研究两个部分,第一部分在理论上将人干扰素α-2b基因（IFNα-2b）编码序列（CDS）改造成大肠杆菌高表达基因的偏好模式,然后配置选定的启动子区和终止子区序列以便构成完整基因。第二部分是为了检验我们的理论方法的可靠性,将改造和优化的人IFNα-2b基因在大肠杆菌中表达。（一）人干扰素α-2b基因改造和优化方案。对编码序列改造分为两步,首先将编码序列中的密码子置换成大肠杆菌高表达基因的最适同义密码子。其次将编码序列中紧邻密码子第三位点的碱基关联置换成大肠杆菌高表达基因的强关联模式。在此过程中,在强关联模式和最适或次最适同义密码子的置换上做出最佳选择。以大肠杆菌中高表达基因lpp的启动区和终止区序列作为改造基因的启动区和终止区序列。以lpp启动区中的SD序列作为高表达启动区的SD序列,将低表达基因的SD序列替换lpp启动区中的SD序列作为对照序列。构造三条完整...
【文章来源】：内蒙古大学内蒙古自治区 211工程院校
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
大肠杆菌高表达基因密码子间第三位点碱基关联强度分布
图 3.1 克隆载体 pGM-T 图谱Fig.3.1 Cloning vector pGM-t map注：图片来自天根克隆试剂盒说明书+)为常用的高效原核表达载体，它需要由 粒图谱如图 3.2 所示：
内蒙古大学硕士学位论文3.2 质粒与菌株-T-T 是高效克隆 PCR 产物的专用载体。由于 PCR 反应是 3，端会添加一个Ａ，形成粘性末端，可正好与载体 5，：
【参考文献】：
期刊论文
[1]重组人干扰素α2b联合孟鲁司特钠治疗伴lgE升高小儿支气管肺炎的疗效分析[J]. 阮仁伟,陈梅俐,刘晓玲,饶群. 广西医科大学学报. 2019(01)
[2]口服重组人干扰素α2b治疗小儿轮状病毒肠炎的多中心随机双盲对照研究[J]. 潘家华,羊礼荣,韩旻,周浩泉,祖庆,周晓丽,顾倩,杨晓光,王子斌,李玉桂. 儿科药学杂志. 2019(01)
[3]重组人干扰素α-2b联合利巴韦林在慢性丙型肝炎治疗中的疗效及外周血变化研究[J]. 陈凤娣,张郴华,李敏. 中医临床研究. 2018(30)
[4]膦甲酸钠氯化钠联合重组人干扰素α-2b栓治疗宫颈癌前病变（CPL）合并HPV高危型（HR-HPV）感染的临床疗效[J]. 石琼. 临床医药文献电子杂志. 2018(05)
[5]大肠杆菌表达系统和酵母表达系统的研究进展[J]. 祁浩,刘新利. 安徽农业科学. 2016(17)
[6]水肥耦合对旱地烟生长、产量、品质及肥料利用率的影响[J]. 刘毅,申昌优,肖先仪,刘小平,廖忠辉,钟玉德,邱荣俊,李祖莹. 江西农业学报. 2012(06)
[7]猪β-干扰素的基因改造表达及其抗猪繁殖与呼吸综合征病毒活性测定[J]. 张显浩,苏丹萍,张艳萍,蒋爱翔,贺东生. 中国畜牧兽医. 2011(10)
[8]聚乙二醇化重组人干扰素α-2b体外抗乙肝病毒作用的研究[J]. 邬婧,戎隆富,程婷,许培,宋礼华. 生物学杂志. 2010(02)
[9]GST-His双标签原核表达载体的构建及应用[J]. 赵静,丁丽华,仇玮祎,牛畅,陈力权,甘纯玑,叶棋浓. 生物技术通讯. 2009(04)
[10]金属硫蛋白非融合性原核表达载体的构建[J]. 谭洁莹,付欣,李冰. 实用医学杂志. 2008(14)
硕士论文
[1]重组人干扰素α-2b的新型制备方法及其长效制剂研究[D]. 赵鑫.吉林农业大学 2016
[2]干扰素α-2b蛋白的制备与纯化[D]. 李强.天津大学 2013
[3]利用原核系统表达富含二硫键蛋白质的探索与改进[D]. 刘开泉.山东农业大学 2011
[4]5’端突变人干扰素-α2b基因在大肠杆菌BL21中的高效表达[D]. 王参军.安徽医科大学 2010
[5]猪a-干扰素单克隆抗体的制备及其特性鉴定[D]. 和燕玲.甘肃农业大学 2009
[6]重组人干扰素α-2b包涵体蛋白的柱层析复性研究[D]. 高飞.安徽大学 2007
[7]猪干扰素α、β、γ基因克隆、原核表达及其单克隆抗体制备的研究[D]. 王晓杜.华中农业大学 2007
[8]人干扰素β在毕赤酵母中的表达纯化活性测定以及人载脂蛋白ProApoA-Ⅰ在大肠杆菌系统中的表达[D]. 房俊强.山东大学 2006
本文编号：2994643
【文章来源】：内蒙古大学内蒙古自治区 211工程院校
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
大肠杆菌高表达基因密码子间第三位点碱基关联强度分布
图 3.1 克隆载体 pGM-T 图谱Fig.3.1 Cloning vector pGM-t map注：图片来自天根克隆试剂盒说明书+)为常用的高效原核表达载体，它需要由 粒图谱如图 3.2 所示：
内蒙古大学硕士学位论文3.2 质粒与菌株-T-T 是高效克隆 PCR 产物的专用载体。由于 PCR 反应是 3，端会添加一个Ａ，形成粘性末端，可正好与载体 5，：
【参考文献】：
期刊论文
[1]重组人干扰素α2b联合孟鲁司特钠治疗伴lgE升高小儿支气管肺炎的疗效分析[J]. 阮仁伟,陈梅俐,刘晓玲,饶群. 广西医科大学学报. 2019(01)
[2]口服重组人干扰素α2b治疗小儿轮状病毒肠炎的多中心随机双盲对照研究[J]. 潘家华,羊礼荣,韩旻,周浩泉,祖庆,周晓丽,顾倩,杨晓光,王子斌,李玉桂. 儿科药学杂志. 2019(01)
[3]重组人干扰素α-2b联合利巴韦林在慢性丙型肝炎治疗中的疗效及外周血变化研究[J]. 陈凤娣,张郴华,李敏. 中医临床研究. 2018(30)
[4]膦甲酸钠氯化钠联合重组人干扰素α-2b栓治疗宫颈癌前病变（CPL）合并HPV高危型（HR-HPV）感染的临床疗效[J]. 石琼. 临床医药文献电子杂志. 2018(05)
[5]大肠杆菌表达系统和酵母表达系统的研究进展[J]. 祁浩,刘新利. 安徽农业科学. 2016(17)
[6]水肥耦合对旱地烟生长、产量、品质及肥料利用率的影响[J]. 刘毅,申昌优,肖先仪,刘小平,廖忠辉,钟玉德,邱荣俊,李祖莹. 江西农业学报. 2012(06)
[7]猪β-干扰素的基因改造表达及其抗猪繁殖与呼吸综合征病毒活性测定[J]. 张显浩,苏丹萍,张艳萍,蒋爱翔,贺东生. 中国畜牧兽医. 2011(10)
[8]聚乙二醇化重组人干扰素α-2b体外抗乙肝病毒作用的研究[J]. 邬婧,戎隆富,程婷,许培,宋礼华. 生物学杂志. 2010(02)
[9]GST-His双标签原核表达载体的构建及应用[J]. 赵静,丁丽华,仇玮祎,牛畅,陈力权,甘纯玑,叶棋浓. 生物技术通讯. 2009(04)
[10]金属硫蛋白非融合性原核表达载体的构建[J]. 谭洁莹,付欣,李冰. 实用医学杂志. 2008(14)
硕士论文
[1]重组人干扰素α-2b的新型制备方法及其长效制剂研究[D]. 赵鑫.吉林农业大学 2016
[2]干扰素α-2b蛋白的制备与纯化[D]. 李强.天津大学 2013
[3]利用原核系统表达富含二硫键蛋白质的探索与改进[D]. 刘开泉.山东农业大学 2011
[4]5’端突变人干扰素-α2b基因在大肠杆菌BL21中的高效表达[D]. 王参军.安徽医科大学 2010
[5]猪a-干扰素单克隆抗体的制备及其特性鉴定[D]. 和燕玲.甘肃农业大学 2009
[6]重组人干扰素α-2b包涵体蛋白的柱层析复性研究[D]. 高飞.安徽大学 2007
[7]猪干扰素α、β、γ基因克隆、原核表达及其单克隆抗体制备的研究[D]. 王晓杜.华中农业大学 2007
[8]人干扰素β在毕赤酵母中的表达纯化活性测定以及人载脂蛋白ProApoA-Ⅰ在大肠杆菌系统中的表达[D]. 房俊强.山东大学 2006
本文编号：2994643
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