一个氢离子探针抑制大鼠骨髓间充质干细胞衰老的机制研究

发布时间：2021-02-06 05:40

　　间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）由中胚层成体干细胞发育而来,具有自我更新能力,并且在一定条件下可以分化为多种细胞和组织,如软骨细胞、成骨细胞、神经细胞、基质细胞和脂肪细胞等。MSCs存在于很多组织中,包括脂肪、骨髓、滑膜和肌肉等,来源于骨髓的MSCs叫做骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）。其中,由于BMSCs具有易于获取、不涉及伦理问题以及相对简单的分离和培养、快速的增殖能力和遗传稳定性好、多向分化潜能、免疫原性低以及可移植性高等优点,使得BMSCs成为广大科研工作者的研究材料和临床应用上理想的种子细胞,也使得BMSCs成为基础研究和转化应用中最热门的一种MSCs。然而,体外培养的骨髓间充质干细胞具有非常有限的增殖潜力,随着培养过程中传代次数增加,BMSCs发生衰老,BMSCs体外的自我更新能力和多向分化潜能会发生下降。BMSCs的衰老极大地限制了其在临床上的应用和疗效,特别是阻碍了老年患者自体体细胞治疗的发展。细胞衰老（cell senescence;cell aging）,一般情... 

【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．?ＳＧＪ的结构式和分子量

我们应用了一个商业化的溶酶体探针ＬｙｓｏＴｒａｃｋｅｒ？?Ｒｅｄ?ＤＮＤ－９９，用于定??位溶酶体。利用激光共聚焦显微镜，我们发现ＳＧＪ与溶酶体的共定位系数是??０．９４，表明了?ＳＧＪ在细胞中可以特异地靶向溶酶体（图２）。??Ａ?ＳＧＪ?Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ?Ｍｅｒｇｅ?Ｃｏｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ??■?■麵＾??Ｃｏｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ?ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ?＝?０．９４??图２．?ＳＧＪ特异地靶向溶酶体。（Ａ）用２〇ｙＭ的ＳＧＪ孵育大鼠ＢＭＳＣｓ?ｌｈ，然后??用０．?５ｗＭ的ＬｙｓｏＴｒａｃｋｅｒ？?Ｒｅｄ?ＤＮＤ－９９孵育细胞３０?ｍｉｎ，用激光扫描共聚焦??显微镜观察ＳＧＪ与溶酶体的共定位情况，计算共定位系数。??４３??

响ＢＭＳＣｓ的溶酶体的功能。我们发现年轻的ＢＭＳＣｓ明显的被Ａ０染色，然而衰老??的ＢＭＳＣｓ?（ＰＤＬ?２０）中的却几乎没有染色。但是ＳＧＪ却能够明显增加衰老细胞??的ＢＭＳＣｓ中的Ａ０染色（图３ａ）。??那么ＳＧＪ是否是通过增加衰老细胞的溶酶体中的Ｈ＇的浓度，从而使得衰老??细胞的Ａ０染色增加？为了解决这个疑问，我们接下来采用了?Ｂａｆ－Ａｌ。Ｂａｆ－Ａｌ??可以抑制是溶酶体膜上的ｖ－ＡＴＰａｓｅ，从而降低溶酶体的酸度。我们分别先用２０??ｎＭ的Ｂａｆ－Ａｌ或２０ｙＭ的ＳＧＪ孵育衰老ＢＭＳＣｓ?（ＰＤＬ?２０）?２４ｈ，再用溶酶体探针??Ｌｙｓｏｓｅｎｓｏｒ？?Ｇｒｅｅｎ?ＤＮＤ－１８９去量化溶酶体中的Ｈ＋浓度。我们发现Ｂａｆ－Ａ１能够??明显的降低酶体中的ＩＴ的浓度，而ＳＧＪ却能够显著的升高溶酶体中｝ｆ的浓度??（图?３ｂ）。??ＬＡＭＰ１?（?ｌｙｓｏｓｏｒａｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ?ｍｅｍｂｒａｎｅ?ｐｒｏｔｅｉｎ?１?）和?ＬＡＭＰ２??（ｌｙｓｏｓｏｍｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ?ｍｅｍｂｒａｎｅ?ｐｒｏｔｅｉｎ?２）是溶酶体膜上的两个蛋白，是??表征溶酶体功能的两个标志物。我们通过Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测，发现ＳＧＪ能够以??ｌｌ、Ｊ？间依赖性的方式上调衰老ＢＭＳＣｓ中溶酶体的ＬＡＭＰ１和ＬＡＭＰ２的蛋白水平（图??３ｃ?）。??因此


本文编号：3020247