真枝藻目环化酶FamC1和FilC1的结构与功能研究

发布时间：2021-02-19 20:10

　　Hapalindole吲哚生物碱是真枝藻目蓝绿藻的一类次级代谢产物,它拥有多个复杂的手性中心,具有广泛的抗菌、抗肿瘤和杀虫等生物活性。近年来,多环系统和潜在的应用价值让其倍受关注,逐渐成为生物化学合成领域的研究热点。本论文研究的FamC1和FilC1这两个真枝藻目环化酶,它们在Hapalindole吲哚生物碱生物合成中发挥了重要的催化作用。因此,其结构与功能催化方面的研究在Hapalindole生物碱生物合成中是尤为重要的。本论文首先将无跨膜区的FamC1和FilC1在E.coli BL21（DE3）表达后经过Ni-NTA和DEAE两步层析纯化蛋白。晶体初筛主要采用坐滴法在48孔晶体板中对Hampton Research晶体筛选试剂盒进行条件筛选。通过汞衍生物的制备和晶体衍射数据的收集,利用SIRAS方法获得了 FamC1初始电子密度图。通过Phenix和Coot进行结构的修正成功解析出FamC1晶体结构。FilC1的结构利用FamC1结构作为模板通过MR方法获得。此外,为了找到底物结合的关键位点,通过浸泡底物类似物法成功获得了 FilC1与CI4、FilC1与4IB复合体结构。Fam... 

【文章来源】：中国科学技术大学安徽省 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．２四种Ｈａｐａｌｉｎｄｏｌｅ类生物碱的生理功能??

．３．１．１生物信息学预测??３．１．１．１?ＦａｍＣ】和ＦｉｌＣ?１结构预测??据李莎莎等人报道［４６］，ＦａｍＣｌ和ＦｉｌＣｌ的序列相似性达到９４％。在ＮＣＢＩ??的ＴＯＢ数据库中进行Ｂｌａｓｔ，结果没有发现与ＦａｍＣｌ序列具有高相似度的蛋白??结构，结果如图３．１所示。通过Ｐｈｙｒｅ?２预测了?ＦａｍＣｌ的三级结构，是以半乳糖??结合区ＣＢＭ４?（ＰＤＢＩＤ：１ＧＵ１）作为模板进行的预测。结果发现６７％的序列参与??预测，可信度为９８．８％，与模板结构的相似度只有２０％，如图３．２所示。预测的??结构是由多个反向平行的（３折叠链组成，表面的ｌｏｏｐ区柔性较大，通常是配体??结合区。??鉴于以上的预测结果，目前这类催化科普重排发生的真枝藻目环化酶的三维??结构还未解析。因此，本课题尝试利用Ｘ射线衍射技术手段解析这两个Ｓｔｉｇ环??化酶的晶体结构，通过结构分析深入了解这类新型的Ｓｔｉｇ环化酶的结构和功能，??也对吲哚生物碱生物合成的研宄具有重要的指导意义。??Ｎｏ?ｐｕｔａｔｉｖｅ?ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ?ｄｏｍａｉｎｓ?ｈａｖｅ?ｂｅｅｎ?ｄｅｔｅｃｔｅｄ??

p七y，2结构预洲结果

【参考文献】：
期刊论文
[1]长春花萜类吲哚生物碱生物合成与调控研究[J]. 匡雪君,王彩霞,邹丽秋,朱孝轩,孙超.  中国中药杂志. 2016(22)
[2]强筋健骨丸治疗骨关节炎60例[J]. 党建军,刘敏,张久红.  陕西中医. 2003(09)

博士论文
[1]吲哚类化合物的合成及其相关问题研究[D]. 郭翔海.天津大学 2006



本文编号：3041623