人凝血因子IX基因在小鼠脂肪干细胞中的稳定表达

发布时间：2021-02-22 20:52

　　目的将携带人凝血因子IX（h FIX）基因（F9）的重组腺病毒转染C57BL/6小鼠脂肪间充质干细胞（adipose-derived stem cell,ADSC）,经过传代培养后,观察F9是否在ADSC中稳定表达,探索ADSC是否可作为血友病基因治疗的载体细胞。方法取C57BL/6小鼠腹股沟区脂肪,依据组织块悬浮法分离培养小鼠ADSC并进行传代培养,应用携带h FIX基因并含GFP荧光标记的重组腺病毒转染第3代ADSC,转染后再次进行传代培养至第4、5代细胞。荧光显微镜下观察细胞携带荧光数量,RT-PCR检测F9基因表达,ELISA法检测细胞上清液及Western Blot检测细胞内携带目的基因表达蛋白情况。结果 （1）重组腺病毒转染后荧光显微镜下可见荧光表达,细胞传代后仍具有荧光。（2） RT-PCR结果显示:四组ADSC均可表达内参GAPDH基因片段,A、B、C组可检测到目的基因F9的表达,D组未检测到F9的表达。（3） ELISA法检测凝血因子IX抗原（h FIX:Ag）结果显示:A组（81.62±8.82） ng/m L、B组（52.50±3.25） ng/m L、C组（47... 

【文章来源】：中国实验动物学报. 2020,28(04)北大核心

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

复苏后ADSC细胞生长情况

Ad-F9-GFP转染细胞及传代后荧光表达

重组腺病毒转染ADSC成骨诱导图

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3046544