基于等温扩增和DNAzyme的生化分析新方法的研究

发布时间：2021-02-26 19:26

　　等温扩增技术操作简单,能够在恒定温度下实现核酸扩增过程,对温度控制要求较低,很好地弥补了传统的聚合酶链反应（PCR）的不足,因此,在病原体和miRNA检测,单核苷酸多态性,DNA甲基化等核酸分析中的应用得到了快速发展。随着适配体,DNAzyme等功能核酸分子的引入,等温扩增技术的应用范围已经拓展到了蛋白,细胞,功能小分子,金属离子等分析检测领域。目前,已经建立了很多种等温扩增技术,其中基于滚环扩增（RCA）和切刻酶辅助的等温扩增技术,设计和扩增体系简单,灵活性和可操作性很强,易于和其他的信号放大技术和检测体系整合在一起,因此,广泛应用于各种类型的生化分析体系。本论文围绕基于等温扩增技术和功能核酸分子的生化分析体系展开,主要包括以下五部分:第一章首先简要介绍了常用的各类等温扩增技术的原理和应用。然后总结了基于等温扩增技术的生化分析中常用的功能核酸分子和信号读出手段。最后着重介绍了基于RCA和切刻酶辅助的等温扩增技术在各类分析物检测中的应用以及在实际样本检测中的问题,并在此基础上,提出了本论文的研究思路和主要内容。在第二章中,我们结合切刻酶辅助的链置换扩增和指数滚环扩增,设计了一种简单的等... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：133 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１．１线性滚环扩增的原理示意图［９］??Ｆｉ．?１．１?Ｓｃｈｅｍｅ?ｏｆ?ｔｈｅｒｉｎｃｉｌｅ?ｆｏｒ?ｌｉｎｅａｒ?ＲＣＡ｜ｌ）１??

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形成的具有特殊结构的功能核酸分子Ｐ１。不同于按照碱基互补配对原则形成的双螺旋结构，??富含鸟嘌呤的寡核苷酸倾向于通过特殊的折叠方式形成四螺旋体结构。Ｇ－四链体的基本结??构单元是由四个鸟嘌呤通过Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎ氢键形成的Ｇ－四分体（图１．４），然后通过７ｔ－７ｉ堆??积相互作用形成四链体结构［２８’２９］。Ｇ－四链体中心孔道带负电荷，金属离子能够嵌入其中。??基于金属离子对Ｇ－四链体结构和性能的影响，研究人员设计了各种不同的策略用于金属??离子检测。Ｓｅｎ等［３（）］提出：Ｇ－四链体和血晶素可以形成复合物，该复合物具有显著的类过??氧化物酶活性。与天然存在的过氧化物酶相比，ＤＮＡｚｙｍｅ性质稳定，易于合成修饰，设??计灵活，在生化分析领域显示出很好的应用前景。例如，利用Ｇ－四链体和血晶素构成的??ＤＮＡｚｙｍｅ的类过氧化物酶活性，可以催化Ｈ２０２与ＴＭＢ（?３，３＇，５，５，－四甲基联苯胺）或ＡＢＴＳ２－??（２，２＇－连氮基－双－（３－乙基苯并二氢噻唑啉－６－磺酸）二铵盐）的比色反应，用于比色分析??中的信号输出；同时

【参考文献】：
期刊论文
[1]化学发光在生化分析中的应用研究进展[J]. 刘萌,王子月,张春阳.  分析化学. 2016(12)
[2]荧光共振能量转移技术在生命科学中的应用及研究进展[J]. 张志毅,周涛,巩伟丽,张德添.  电子显微学报. 2007(06)



本文编号：3053056