VEGF-Ax对大鼠骨髓间充质干细胞成血管分化的调节作用及其促血管生成能力的研究
发布时间：2021-03-06 00:22
研究背景:血管内皮生长因子A（Vascular endothelial growth factor A,VEGF-A）在血管生成的调控中起到关键作用。VEGF-A包括多种亚型。起初,人们认为不同的VEGF-A亚型是通过VEGF-A的mRNA的可变剪切产生,且这些亚型在血管生成的过程中起到各异的调节作用,包括促进血管生成和拮抗血管生成两个方面。它们也因此被命名为VEGFxxxa或者VEGFxxxb,例如VEGF165b,VEGF121a等。其中“xxx”代表最终蛋白质序列中存在的氨基酸数量,而“a/b”代表VEGF-A基因6号染色体第8外显子的不同片段:CDKPRR/SLTRKD。最近有研究发现,VEGF-A 的 mRNA 程序性翻译通读（programmed translational readthrough,PTR）过程可以产生一种新的VEGF-A亚型,这种亚型使用非经典终止密码子在VEGF-A基因的羧基末端产生一段包含22个氨基酸的延伸,因此被命名为VEGF-Ax,x代表“extend”。有意思的是,VEGF-Ax的功能尚未定论,特别是关于VEGF-Ax调节血管生成的结论是矛盾的。...
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：110 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图２大鼠ＢＭＭＳＣｓ表面特异性标记物
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?博士学位论文???＿氣??．．Ｃ??圓Ｒｉ??ＬＶ－ＶＥＧＦ－Ａｘ?Ｓｃｒａｍｂｌｅ??图６过表达慢病毒的转染。以ＭＯ丨＝２０抟染慢病存７２小財后实验纟丨ｌ?４阴性对照纟丨〖细胞明场??Ｆ细胞形态１?Ｊ荧光显微镜Ｋ荧光及达水个（４０Ｘ）。＂Ｊ？阽细胞状态Ｑ好，矜染效韦Ａ。??Ｆｉｇ?６．?Ｆｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ?ａｎｄ?ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｏｖｅｒ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ?Ｉｃｎｔｉｖｉｒｕｓｅｓ．?７２?ｈｏｕｒｓ?ａｆｔｅｒ??ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ?ｏｆｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ?ｗｉｔｈ?Ｍ（）Ｉ＝２０．?ｔｈｅ?ｃｅｌｌ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ?ｇｒｏｕｐ?ａｎｄ?ｔｈｅ??ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ?ｕｎｄｅｒ?ｂｒｉｇｈｔ?ｆｉｅｌｄ?ａｎｄ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｖｅｌ?ｕｎｄｅｒ?ａ??ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ?（４０Ｘ）．?Ｉｔ?ｃａｎ?ｂｅ?ｓｅｅｎ?ｔｈａｔ?ｔｈｅ?ｃｅｌｌｓ?ａｒｅ?ｉｎ?ｇｏｏｄ?ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ?ａｎｄ?ｔｈｅ??ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ?ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ?ｉｓ?ｈｉｇｌｉ．??接下来，因为ＶＥＧＦ－Ａ各亚型之间的高度同源性，抗体往往不能特异性识??别某一种亚型。因为抗体识别的是蛋白上特定的抗原决定簇，ＶＥＧＦ－Ａ众多亚型??中的抗原决定簇都是一致的。因此我们在前期做了很多鉴别工作。为了证明过??２９??
本文编号：3066113
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：110 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图２大鼠ＢＭＭＳＣｓ表面特异性标记物
?第１章大鼠骨髓间充质干细胞提取以及过表达ＶＥＧＦ－Ａｘ模型的建立???１???麵，??■■■??Ｍ０Ｉ＝１?Ｍ０Ｉ＝５?Ｍ０Ｉ＝１０?Ｍ０Ｉ＝２０??图５大鼠ＶＥＧＦ－Ａｘ过表达慢病毒最佳！ＶＩＯｒ测定。转染７２小时Ｇ各组细胞芡光农达水平??转染效率随着ＭＯＩ增加而增强，当Ｍ０丨为２０的时候己经能得到满意的荧光表达。当ＭＯＩ??泄＇？?２０时，转染效率较差。??Ｆｉｇ?５．?Ｏｐｔｉｍａｌ?．ＭＯＩ?ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｒａｔ?Ｖ?ＥＧＦ－Ａｘ?ｏｖｅｒ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ?ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ．?７２?ｈｏｕｒｓ??ａｆｔｅｒ?ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ，?ｔｈｅ?Ｈｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｖｅｌｓ?ｏｆ?ｃｅｌｌｓ?ｉｎ?ｅａｃｈ?ｇｒｏｕｐ．?Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ??ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ?ｉｎｃｒｅａｓｅｄ?ｗｉｔｈ?ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ?ＭＯＩ．?Ｗｈｅｎ?ｔｈｅ?ＭＯＩ?ｉｓ?２０，?ｓａｔｉｓｆａｃｔｏｒｙ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ??ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｈａｓ?ｂｅｅｎ?ｏｂｔａｉｎｅｄ．?Ｗｈｅｎ?ｔｈｅ?ＭＯＩ?ｉｓ?ｌｅｓｓ?ｔｈａｎ?２０，?ｔｈｅ?ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ?ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ?ｉｓ??ｐｏｏｒ．??３．２．３过表达慢病毒的转染及验证??鉴于千细胞转染慢病毒存在一定的难度。我们用慢病毒转染大鼠??ＢＭＭＳＣｓｌ２小时后，再用嘌呤霉素连续筛选４８小时，７２小时细胞荧光表达效??率大于９５％?（图６），结合明场与焚光情况可知，大鼠ＢＭＭＳＣｓ状态良好，长??梭形生长，均匀分布；慢病毒转染效率高，ＧＦＰ荧光均一。慢病毒成功转染
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本文编号：3066113
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