斑节对虾carcininPm3的表达及其无标签多肽的获得

发布时间：2021-03-11 03:59

　　crustin是对虾中重要的抗菌肽,本研究获得的carcinin Pm3属于斑节对虾crustin家族,是一种新型抗菌肽,成熟肽含有92个氨基酸,与其他对虾抗菌肽的同源性小于45%.根据其氨基酸序列和大肠杆菌（Escherichia coli,E. coli）的密码子偏好性设计carcinin Pm3的基因序列,将carcinin Pm3连接到原核表达载体pSmartI-SUMO上,构建重组表达载体p SmartI-SUMO-carcinin Pm3,再转化至原核表达菌株E. coli BL21 （DE3）中,通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropylβ-D-thiogalactopyranoside,IPTG）诱导SUMOcarcinin Pm3的融合表达,进一步优化其表达条件,获得表达量大、可溶性高的重组蛋白.通过亲和层析纯化得到重组蛋白,蛋白的质量浓度达到195μg/m L.利用SUMO酶去除SUMO融合标签,获得没有外源标签的carcinin Pm3抗菌肽,可用于蛋白功能分析、抗体制备等研究.研究结果为carcinin Pm3功能的分析及应用提供参考. 

【文章来源】：深圳大学学报(理工版). 2020,37(01)北大核心

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

重组质粒的构建

将正确的重组质粒转入E.coli BL21(DE3)进行表达，并对carcinin Pm3的可溶性进行检测，结果如图2．由图2可见，诱导6 h后融合蛋白carcinin Pm3得以正常表达，分子质量约为25 k Da，并且存在于上清中，表明融合蛋白carcinin Pm3是可溶性蛋白．2.3 获得carcinin Pm3最优表达条件

图3为carcinin Pm3原核表达及可溶性分析结果．由图3可见，在1 mmol/L的IPTG诱导下，融合蛋白carcinin Pm3的表达量逐渐增大，6 h及之后的表达量接近．图4的电泳结果显示，在不同终浓度IPTG条件下诱导6 h,0.2、0.8和1.0 mmol/L诱导蛋白的表达量相差不大，又因IPTG具有毒性，会危害表达宿主，所以选择IPTG终浓度为0.2mmol/L．因此，可确定融合蛋白carcinin Pm3的在IPTG终浓度为0.2 mmol/L条件下诱导6 h表达量最大．图4 carcinin Pm3原核表达的IPTG浓度优化

【参考文献】：
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本文编号：3075821