非受体酪氨酸激酶c-Abl和Arg通过磷酸化IRF3调控IFN-β的表达
发布时间：2021-03-23 11:16
病原体的先天免疫应答对宿主实施防御应答很重要。通过模式识别受体（PPRs）识别病原体相关分子模式（PAMPs）,宿主感应病毒和细菌病原体的入侵。干扰素调节因子3（IRF3）是针对DNA病毒和RNA病毒感染免疫应答的I型干扰素依赖的关键转录调节因子。IRF3在非感染细胞中定位于细胞质中,病毒感染后转移到细胞核中。病毒感染后,IRF3 C端385位、386位、396位、402位、403位丝氨酸和404位苏氨酸发生磷酸化,丝氨酸磷酸化对IRF3激活并调控IFN-β表达非常重要。通过与其他蛋白发生相互作用,非受体酪氨酸激酶c-Abl参与调控骨架重塑、细胞黏附、细胞增殖、氧化和DNA损伤应激、自噬、细胞转化、细胞凋亡以及细胞迁移等,c-Abl也能调控胸腺细胞的分化,促进脂肪细胞的分化。非受体酪氨酸激酶c-Abl在T细胞发育和免疫应答中也发挥重要作用。然而,人们对c-Abl在先天免疫中的功能了解得还不多。本文目的在于研究c-Abl在先天免疫调控中的作用及机理。实验室前期研究结果表明,c-Abl可以调控多个I型干扰素应答基因的表达,提示c-Abl可能与IRF3相互作用并调节其活性。用抗c-Abl抗体...
【文章来源】：军事科学院北京市
【文章页数】：100 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
导致I型干扰素产生的主要胞内通路8细胞质dsDNA能直接被IFN调节因子的受体DNA依赖的激活子（DAI）
图 2 c-Abl 的结构示意图158上图显示了全长 c-Abl 的各部分的晶体结构，包括核心部分、F-肌动蛋白结合结构域-FABD、N 端（N-Cap）和 C 端柔性片段。红色部分显示核心部分的连接区域。c-Abl 的特征是含有一个长的 C 端尾巴。遗传上，该尾巴对 c-Abl 的功能键的，c-Abl C 端截断的纯合子小鼠普遍表现出 c-Abl 缺失小鼠的表型缺陷17该区域包含三个 PxxP 基序，负责与含 SH3 的蛋白质相互作用。C 端尾巴也包个核定位信号（NLSs）和一个核输出信号（NES）基序、一个假定的包含类动性组结构域的 DNA 结合结构域180, 181和一个肌动蛋白结合结构域(FABD)1182。NLS 和 NES 的出现使得 c-Abl 蛋白能基于细胞的需求在两种细胞组分之梭。在脊椎动物中，c-Abl C 端的 FABD 结构域调控其与肌动蛋白的结合、集微管交联，这对细胞迁移、黏附、内吞作用、细胞内运输、自噬等具有重要183
2.1.2 过表达 c-Abl 与 IRF3 相互作用为了进一步证实 c-Abl 与 IRF3 之间的相互作用，本研究首先在 HEK293 细胞中共表达 Flag-IRF3 和 Myc-c-Abl，Flag-IRF3 和 myc-vector 质粒共转染组作为阴性对照。质粒转染后 36~48h 收细胞并用含蛋白酶抑制剂的裂解液裂解细胞25~30min，14000g，4℃离心 15min，留取上清，用抗 Myc 琼脂糖珠进行免疫共沉淀，并对免疫共沉淀产物进行免疫印迹检测。结果显示 Flag-IRF3 与 myc-c-Abl 相互作用，而不与对照 myc-vector 相互作用（图 4 A）。另外，为了排除标签对两个蛋白之间相互作用的影响，我们也用 Flag-c-Abl和 Myc-IRF3 共转染 293T 细胞，用抗 Flag 琼脂糖珠进行免疫共沉淀反应，并对免疫沉淀产物进行免疫印迹实验，结果在 anti-Flag 免疫沉淀物中检测到 Myc-IRF3，在 IgG 免疫共沉淀产物中没有检测到 myc-IRF3，这进一步证实了 c-Abl 与 IRF3 相互作用（图 4 B）。
本文编号：3095695
【文章来源】：军事科学院北京市
【文章页数】：100 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
导致I型干扰素产生的主要胞内通路8细胞质dsDNA能直接被IFN调节因子的受体DNA依赖的激活子（DAI）
图 2 c-Abl 的结构示意图158上图显示了全长 c-Abl 的各部分的晶体结构，包括核心部分、F-肌动蛋白结合结构域-FABD、N 端（N-Cap）和 C 端柔性片段。红色部分显示核心部分的连接区域。c-Abl 的特征是含有一个长的 C 端尾巴。遗传上，该尾巴对 c-Abl 的功能键的，c-Abl C 端截断的纯合子小鼠普遍表现出 c-Abl 缺失小鼠的表型缺陷17该区域包含三个 PxxP 基序，负责与含 SH3 的蛋白质相互作用。C 端尾巴也包个核定位信号（NLSs）和一个核输出信号（NES）基序、一个假定的包含类动性组结构域的 DNA 结合结构域180, 181和一个肌动蛋白结合结构域(FABD)1182。NLS 和 NES 的出现使得 c-Abl 蛋白能基于细胞的需求在两种细胞组分之梭。在脊椎动物中，c-Abl C 端的 FABD 结构域调控其与肌动蛋白的结合、集微管交联，这对细胞迁移、黏附、内吞作用、细胞内运输、自噬等具有重要183
2.1.2 过表达 c-Abl 与 IRF3 相互作用为了进一步证实 c-Abl 与 IRF3 之间的相互作用，本研究首先在 HEK293 细胞中共表达 Flag-IRF3 和 Myc-c-Abl，Flag-IRF3 和 myc-vector 质粒共转染组作为阴性对照。质粒转染后 36~48h 收细胞并用含蛋白酶抑制剂的裂解液裂解细胞25~30min，14000g，4℃离心 15min，留取上清，用抗 Myc 琼脂糖珠进行免疫共沉淀，并对免疫共沉淀产物进行免疫印迹检测。结果显示 Flag-IRF3 与 myc-c-Abl 相互作用，而不与对照 myc-vector 相互作用（图 4 A）。另外，为了排除标签对两个蛋白之间相互作用的影响，我们也用 Flag-c-Abl和 Myc-IRF3 共转染 293T 细胞，用抗 Flag 琼脂糖珠进行免疫共沉淀反应，并对免疫沉淀产物进行免疫印迹实验，结果在 anti-Flag 免疫沉淀物中检测到 Myc-IRF3，在 IgG 免疫共沉淀产物中没有检测到 myc-IRF3，这进一步证实了 c-Abl 与 IRF3 相互作用（图 4 B）。
本文编号：3095695
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